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1、目的:通過(guò)對(duì)人膀胱組織不同區(qū)域內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞(InterstitialCellsofCajal,ICCs)和一氧化氮合酶-1(NitricOxideSynthase-1,NOS-1)陽(yáng)性神經(jīng)的分布密度以及ICCs細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的觀(guān)察,探尋ICCs細(xì)胞作為人膀胱自主節(jié)律性起搏細(xì)胞的分布意義,為在生理學(xué)進(jìn)一步研究人膀胱活動(dòng)的機(jī)制及臨床上治療某些膀胱功能障礙性疾病開(kāi)拓新思路。
方法:本試驗(yàn)以人膀胱組織為研究對(duì)象,制作冰凍切片,運(yùn)
2、用激光共聚焦顯微鏡(LaserScanningConfocalMicroscope,LSCM)觀(guān)察CD117(Clusterofdifferentiation117)陽(yáng)性ICCs細(xì)胞在人膀胱組織不同區(qū)域的分布;同時(shí)結(jié)合CD117、NOS-1免疫熒光雙重標(biāo)記技術(shù)在同一視野下觀(guān)察ICCs細(xì)胞與NOS-1陽(yáng)性神經(jīng)的空間分布關(guān)系,透射電鏡下觀(guān)察人膀胱ICCs細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。
結(jié)果:通過(guò)LSCM觀(guān)察可見(jiàn)CD117呈陽(yáng)性的ICCs細(xì)胞出現(xiàn)
3、在膀胱不同解剖區(qū)域及組織層次中,熒光主要在細(xì)胞膜及突起著色,細(xì)胞呈梭形,軸向兩端存在突起。解剖區(qū)域中ICCs細(xì)胞存在于膀胱頂部最多,膀胱體部次之,膀胱頸部罕見(jiàn)。組織學(xué)區(qū)域中ICCs細(xì)胞主要存在于肌層和黏膜下層,黏膜層少見(jiàn)。免疫熒光雙重標(biāo)記可以觀(guān)察發(fā)現(xiàn)ICCs細(xì)胞同時(shí)可表達(dá)NOS-1,總體上雙重染色未發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞有明顯的共表達(dá),但可見(jiàn)NOS-1表達(dá)陽(yáng)性神經(jīng)多在ICCs細(xì)胞附近;透射電鏡(TransmissionElectronMicros
4、cope,TEM)可見(jiàn)ICCs細(xì)胞有圓形或卵圓形的細(xì)胞核,基板不連續(xù),細(xì)胞內(nèi)存在發(fā)育良好的線(xiàn)粒體,相對(duì)豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和游離核糖體,微管微絲罕見(jiàn),某些ICCs細(xì)胞膜上可見(jiàn)內(nèi)陷,胞漿內(nèi)可見(jiàn)液泡,存在類(lèi)似神經(jīng)突觸樣結(jié)構(gòu);
結(jié)論:在人膀胱不同區(qū)域存在的ICCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫表型與在消化道發(fā)現(xiàn)的ICCs細(xì)胞類(lèi)似,其在膀胱不同區(qū)域的分布情況不同,ICCs細(xì)胞在人膀胱頂部肌層大量存在,很可能構(gòu)成了膀胱活動(dòng)的第一起搏點(diǎn),使慢波向膀胱體、膀
5、胱頸傳播,這種分布規(guī)律與膀胱的生理功能相契合,為ICCs細(xì)胞作為膀胱舒縮功能的始動(dòng)細(xì)胞提供理論依據(jù),處于體部和頸部的ICCs細(xì)胞起著傳遞慢波興奮和協(xié)調(diào)膀胱舒縮的作用.NOS-1陽(yáng)性神經(jīng)周?chē)梢?jiàn)ICCs細(xì)胞,兩者關(guān)聯(lián)密切且多分布于膀胱肌層及黏膜下區(qū)域,提示NOS-1陽(yáng)性神經(jīng)可能以ICCs細(xì)胞作為靶點(diǎn)共同參與對(duì)膀胱舒縮活動(dòng)的綜控;雙重標(biāo)記可見(jiàn)ICCs細(xì)胞表達(dá)NOS-1,推測(cè)其也可分泌NO(Nitricoxide,NO),透射電鏡觀(guān)察到Caj
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