Cajal間質細胞在實驗性乳鼠巨結腸模型不同腸段的分布變化研究.pdf

1、先天性巨結腸（Hirschsprung’sdisease，HD）是一種腸神經系統先天性異常疾病，其發(fā)病機制尚不十分明確[1]。目前多認為遺傳及環(huán)境多種因素綜合作用、共同調控的結果[2]。發(fā)病率為1/5000，以男性多見，男：女為4：1。近年來HD的發(fā)病率似有上升趨勢[1,2,3]。主要病理改變?yōu)椴∽兘Y腸段神經節(jié)細胞缺如，病變結腸持續(xù)性痙攣，狹窄，腸蠕動障礙，近端腸腔擴張，內容物潴留，形成巨結腸。新生兒表現為胎糞延遲排出、腸梗阻等癥狀，嬰

2、兒和成人表現為嚴重便秘、腹脹，常合并小腸結腸炎、低位腸梗阻，嚴重影響患兒生活質量甚至危及生命[2,4]。研究顯示，HD患兒嚴重的結腸功能障礙與Cajal間質細胞(interstitialcellsofCajal，ICC)ICC的分布、數量及功能密切相關[4]。ICC廣泛分布于消化道，是胃腸慢波活動起搏細胞及基本電節(jié)律的主要傳播細胞[5]，并參與胃腸道神經信息的傳遞[3]。由于直接人體研究會受到一定限制，本研究以6～7日齡SD乳鼠為實驗動

3、物制備巨結腸模型，采用ICC的特異標志物c-kit多克隆抗體免疫熒光染色，對ICC在巨結腸模型狹窄段、擴張段和移行段的分布規(guī)律進行了較詳細的觀察，探討ICC在HD發(fā)病中的作用，為研究HD腸運動功能障礙和治療提供實驗依據。為日后進一步深入研究HD及其相關并發(fā)癥的病因病理生理機制、病程演變特征及治療方面等奠定實驗基礎。
　　目的用化學方法選擇性損毀6～7日齡SD乳鼠結腸神經節(jié)細胞，建立接近于人類HD的實驗性乳鼠巨結腸模型；通過大體觀察

4、，組織病理學，NSE和S-100蛋白免疫組化鑒定模型；c-kit多克隆抗體免疫熒光檢測實驗性乳鼠巨結腸模型結腸狹窄段、擴張段、移行段和正常組中ICC分布、形態(tài)變化，探討ICC在HD發(fā)病中的作用，為探索適應范圍廣、安全、有效、無創(chuàng)的治療新方法奠定實驗基礎。
　　方法
　　1．9窩(每窩10只乳鼠)6～7日齡SD乳鼠隨機分為3組，實驗組3窩用0．1％苯扎氯銨(Benzalkoniumchloride，BAC)溶液處理降結腸15m

5、in，對照組用生理鹽水代替，正常組不做任何處理。
　　2．分別于術后第1、3、5、6、7周每組隨機取2只乳鼠處死，通過大體觀察處理段結腸及近端結腸形態(tài)變化，組織學病理學、NSE和S-100蛋白免疫組織化學染色觀察結腸神經節(jié)細胞的消除情況。
　　3．c-kit多克隆抗體免疫熒光染色檢測ICC在乳鼠巨結腸模型結腸狹窄段、擴張段、移行段和對照組的分布、形態(tài)變化。
　　結果
　　1．實驗組和對照組術后1～3周大體觀察無明

6、顯變化，術后4～6周實驗組部分大鼠出現腹脹，排便減少，糞便顆粒變小，處死后大體解剖可見BAC處理段狹窄。術后7周實驗組大鼠均出現不同程度的排便減少，腹脹，精神萎靡，消瘦，糞便顆粒比對照組和正常組干燥且明顯變小，處死后大體解剖發(fā)現，BAC處理段腸管狹窄痙攣，無蠕動，病變近端腸管擴張，腸腔內容物潴留。對照組及正常組大鼠腸管無此變化。
　　2．實驗組術后1、3、5、6周組織病理學可見肌間及粘膜下神經節(jié)細胞逐漸減少，術后7周肌間及粘膜下神

7、經節(jié)細胞完全消失，腸壁其他結構完整，未發(fā)現瘢痕的形成及炎癥細胞的浸潤。對照組和正常組可見正常的肌間和粘膜下神經節(jié)細胞。
　　3．實驗組S-100蛋白和NSE表達在術后1、3、5、6周位于肌間及粘膜下神經節(jié)細胞逐漸減少，術后7周肌間及粘膜下S-100蛋白和NSE表達的神經節(jié)細胞完全消失，對照組及正常組無明顯變化。術后7周通過大體觀察、實驗組HE染色、免疫組織化學染色可見肌間和粘膜下神經節(jié)細胞消失，表明巨結腸模型建立成功。
　　

8、4．c-kit多克隆抗體免疫熒光檢測ICC在實驗性乳鼠巨結腸不同腸段的分布。對照組結腸組織ICC主要分布于粘膜下神經叢和肌間神經叢，ICC呈連續(xù)性分布，相互連接形成網絡狀結構。狹窄段結腸組織ICC的分布顯著減少或消失，較移行段、擴張段和對照組均有顯著性差異(P<0．01)，ICC的網絡狀結構完全破壞，殘存ICC形態(tài)異常，移行段結腸組織內ICC的分布較對照組和擴張段組均減少(P<0．05)，其形態(tài)部分接近正常，但ICC缺乏連續(xù)性分布，未能

9、形成正常的網絡狀結構。擴張段與對照組結腸組織內ICC分布，無顯著性差異(P>0．05)。
　　結論
　　1．6～7日齡乳鼠用0．1％BAC可成功建立乳鼠巨結腸模型，該模型與HD具有相似的病理特征；
　　2．結腸神經節(jié)細胞的數量及功能與HD的發(fā)生發(fā)展有密切關系；
　　3．NSE、S-100蛋白可作為診斷和鑒別HD的特異性指標；
　　4．觀察ICC在乳鼠巨結腸模型狹窄段、移行段和擴張段腸管分布與形態(tài)的差別，發(fā)現