SCF對高糖環(huán)境下膀胱cajal樣間質(zhì)細胞c-kitmRNA及蛋白表達影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)及激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)技術,檢測SCF干預對高糖環(huán)境下體外培養(yǎng)的豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細胞c-kit mRNA及蛋白的表達,探討SCF干預對高糖環(huán)境中已發(fā)生形態(tài)、機能變化的豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細胞表型、功能逆轉(zhuǎn)的可能性和可行性。
   方法:本實驗通過膠原酶酶解法分離、提取、純化豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細胞并培養(yǎng)24小時后,分別加入不同葡萄糖濃度(15mmol/L

2、、30mmol/L)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)72小時后(c-kit明顯降低時期),然后分別加入不同SCF濃度(50 ng/ml、100 ng/ml)培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時或72小時。應用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測膀胱Cajal樣間質(zhì)細胞c-kit mRNA含量;應用激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)檢測膀胱Cajal樣間質(zhì)細胞c-kit蛋白表達。
   結果:豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細c-kit mRNA含量和蛋白表達各單純高糖

3、對照組均比正常對照組明顯下降(p<0.01);24小時組,SCF50ng/ml干預組c-kit mRNA含量和蛋白表達較高糖15mmol/L對照組無差異(p>0.05),SCF100ng/ml干預組c-kit mRNA含量和蛋白表達較15mmol/L高糖對照組升高(p<0.05),SCF50ng/ml、SCF100ng/ml干預組c-kit mRNA含量和蛋白表達較30mmol/L高糖對照組均無差異;72小時組,SCF50 ng/ml、

4、SCF100ng/ml干預組c-kit mRNA含量和蛋白表達均較15mmol/L高糖對照組明顯升高(p<0.01),SCF50 ng/ml、SCF100 ng/ml干預組c-kit mRNA含量和蛋白表達較30mmol/L高糖對照組升高(p<0.01)。
   結論:微環(huán)境高糖環(huán)境可導致體外培養(yǎng)的豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細胞c-kit表達下降,從而使SCF/c-kit信號通路受阻,在微環(huán)境中加入高濃度SCF刺激后,可促進高糖環(huán)

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