丹參酮ⅡA對高糖環(huán)境下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、背景和目的:研究表明病理?xiàng)l件下成纖維細(xì)胞來源于自身的增殖活化，近來發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(Endothelial-mesenchymal transition，EndMT)途徑也生成大量的成纖維細(xì)胞。炎癥因子、高糖、缺氧等刺激微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生EndMT，使內(nèi)皮細(xì)胞獲得了纖維細(xì)胞的特征表型a平滑肌肌動蛋白(a-smouthmuscle actin，a-SMA)，細(xì)胞形態(tài)由卵石狀變成梭形，類似成纖維細(xì)胞，并具備其相應(yīng)的功能，在纖維化進(jìn)程中

2、發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)體外分離培養(yǎng)SD大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，通過高糖刺激大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)建EndMT模型，并觀察丹參酮ⅡA對EndMT及Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白分泌的影響。
　　方法:采用酶消化法從5-7日齡SD大鼠心臟獲得心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，采用兩次差速貼壁法分離純化細(xì)胞，通過免疫熒光CD31、Ⅷ因子表達(dá)進(jìn)行鑒定，采用第二代大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為五組，A:正常培養(yǎng)組;B:甘露醇滲透壓對照組;C:高糖培養(yǎng)組（30mm

3、ol/L）;D:高糖+低劑量丹參酮ⅡA(10-5mol/L TSNⅡA)組;E:高糖+高劑量丹參酮ⅡA(10-4mol/L TSNⅡA)組。培養(yǎng)至第3天，經(jīng)免疫熒光檢測CD31和a-SMA的表達(dá)及結(jié)合細(xì)胞形態(tài)變化鑒定心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)分化，半定量PCR檢測各組細(xì)胞a-SMA、TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:細(xì)胞培養(yǎng)后經(jīng)免疫熒光CD31及Ⅷ因子鑒定，符合心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的特征，免疫熒光顯示高糖組

4、部分細(xì)胞呈CD31、a-SMA染色雙陽性;半定量PCR結(jié)果顯示:高糖組a-SMA、TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA均較正常對照組表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)，甘露醇組與正常組表達(dá)無差異;高劑量丹參酮ⅡA組a-SMA、TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA與高糖組相比明顯下調(diào)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:高糖培養(yǎng)下可以誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化和Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達(dá)的增加;丹參酮ⅡA能在一定程度上抑制間質(zhì)轉(zhuǎn)分化及Ⅰ