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文檔簡介
1、第一部分殺傷細胞免疫球蛋白樣受體及其HLA-C配體基因與不明原因早期復發(fā)性自然流產(chǎn)的關(guān)聯(lián)性研究第一節(jié)不明原因早期復發(fā)性自然流產(chǎn)患者夫婦雙方殺傷細胞免疫球蛋白樣受體及其HLA-C配體基因多態(tài)性的研究 目的:復發(fā)性自然流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion,RSA)病因復雜,其中近1/2原因不明,其免疫發(fā)病機理尚不清楚,近年來,母胎界面上自然殺傷細胞(NK細胞)的作用受到人們關(guān)注,NK細胞的功能主要通過其
2、表面受體與靶細胞表面配體結(jié)合來調(diào)節(jié),殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIR)主要存在于NK細胞和部分T細胞表面,通過與靶細胞表面HLA配體識別調(diào)節(jié)NK細胞功能,編碼KIR及其HLA配體的基因在人群中均具有高度多態(tài)性,本研究的目的是通過研究KIR及其HLA-C配體基因多態(tài)性與不明原因的早期復發(fā)性自然流產(chǎn)是否存在關(guān)聯(lián),探討免疫遺傳因素在RSA發(fā)病中的作用。
3、 方法:篩選2004年2月-2007年1月我院就診的73對不明原因的早期復發(fā)性自然流產(chǎn)患者夫婦,隨機選取我院保健門診進行健康查體的志愿者夫婦68對作為對照者,用序列特異性引物聚合酶鏈反應(PCR/SSP)法,對每對入選者進行15種KIR基因和8種HLA-C基因位點的檢測,比較RSA患者和正常對照者間KIR和HLA-C基因頻率及分布有無統(tǒng)計學差異。 結(jié)果:1.RSA病例組KIR2DS1基因陽性率較對照組顯著升高(P=0.029)。
4、2.RSA病例組活化性KIR基因平均數(shù)較對照組顯著升高(P=0.041)。3.RSA病例組中攜帶2個以上活化性KIR基因的個體較對照組明顯增多,差異具有顯著性(P=0.018)。4.RSA病例組中雙方均檢測到HLA-C第2組等位基因(Cw分子α重鏈上第80位為賴氨酸)的夫婦顯著少于對照組,而RSA病例組中雙方均未檢測到HLA-C第2組等位基因的夫婦顯著多于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.005)。5.女方KIR2DL1基因陽性且夫婦雙
5、方都具有第2組Cw等位基因的患者顯著少于對照者(P=0.007),女方KIR2DS1基因陽性且夫婦雙方都具有第2組Cw等位基因的患者顯著少于對照者(P=0.002)。6.KIR2DS1陽性患者夫婦雙方第2組HLA-C等位基因組合分布與對照者差異有顯著性(P=0.004). 結(jié)論:1.KIR2DS1基因陽性率的增高以及活化性KIR基因數(shù)目增多可能是不明原因早期復發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)病原因之一。2.夫婦雙方第2組HLA-C等位基因減少可
6、能與不明原因早期復發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)病有關(guān)。3.KIR2DS1基因陽性夫婦缺乏第2組HLA-C等位基因可能增加早期復發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)病機率。 目的:探討不明原因的早期復發(fā)性自然流產(chǎn)患者殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)基因型分布特點。 方法:采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(PCR/SSP)法,分析在我院就診的95例不明原因復發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)患者和111例無血緣關(guān)系的正常婦女KIR基因型。 結(jié)果:RSA病例組2
7、DL1+,2DL2+,2DL3+,2DL4+,2DL5+,3DL1+,3DL2+,3DL3+,2DS1+,2DS2+,2DS3-,2DS4+,2DS5+,3DS1+,KIR2DP1+基因型陽性率最高,占14.74%,正常對照組2DL1+,2DL2-,2DL3+,2DL4+,2DL5-,3DL1+,3DL2+,3DL3+,2DS1-,2DS2-,2DS3-,2DS4+,2DS5-,3DS1-,KIR2DP1+基因型陽性率最高,占20.72
8、%,且RSA病例組2DL1+,2DL2+,2DL3+,2DL4+,2DL5+,3DL1+,3DL2+,3DL3+,2DS1+,2DS2+,2DS3+,2DS4+,2DS5+,3DS1+,KIR2DP1+基因型陽性率較正常對照組顯著升高(P=0.007)。 結(jié)論:RSA患者中有新的KIR基因型存在,RSA患者與正常對照者KIR基因型分布差異可能是RSA發(fā)病的原因之一。 目的:探討轉(zhuǎn)錄水平殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)在
9、不明原因早期復發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)患者和正常對照者早孕子宮蛻膜組織中表達的差異。 方法:選擇2006年1月至2007年6月我院就診的RSA患者和同期我院計劃生育門診因計劃外妊娠行人工流產(chǎn)術(shù)者各30例,并根據(jù)孕周分組,應用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、3DL1、3DL2 mRNA在RSA患者和對照者早孕子宮蛻膜組織中的表達,應用SYBR Green I熒光實時定量PCR法
10、檢測KIR2DL1、2DL3mRNA在子宮蛻膜組織中的相對表達量,比較RSA患者和對照者早孕子宮蛻膜組織抑制性KIRmRNA表達的差異。 結(jié)果:1.蛻膜組織中檢出KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、3DL1、3DL2基因表達,其中RSA患者KIR2DL2表達率較正常對照組降低,但差異無統(tǒng)計學意義。2.RSA患者KIR2DL1、2DL3相對表達量較正常對照者降低,但差異無統(tǒng)計學意義。3.不同孕周的患者KIR2DL1、2D
11、L3相對表達量較同期正常對照組降低,但差異無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論:早孕蛻膜組織KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、3DL1、3DL2mRNA的表達變化與不明原因早期復發(fā)性自然流產(chǎn)無直接關(guān)系。 目的:探討不明原因早期復發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)患者和正常對照者早孕子宮蛻膜組織中殺傷細胞免疫球蛋白樣受體CD158表達的特征。 方法:選擇2006年1月至2007年6月我院就診的RSA患者和同期我院計劃生育門診因計劃
12、外妊娠行人工流產(chǎn)術(shù)者各30例,并根據(jù)孕周分組,應用免疫熒光染色法和流式細胞術(shù)檢測早孕蛻膜組織細胞表面標記,比較RSA患者和對照者CD56、CD16、CD158a(KIR2DL1)、CD158b(KIR2DL2/3)表達的變化規(guī)律。 結(jié)果:1.早孕子宮蛻膜組織小動脈和腺體周圍可見大量CD56+細胞分布。2.RSA患者CD56+細胞數(shù)顯著少于對照者(P=0.007),≤7孕周患者CD56+細胞數(shù)與同孕期對照者有極顯著差異(P=0.0
13、04),隨著孕周的增加差異減小。RSA患者CD56+CD16-細胞較對照者降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)3.RSA患者蛻膜單個核細胞CD158a在早孕各時期表達量均顯著下降(P<0.05),而CD158b在≤孕10周患者中表達量顯著下降(P<0.05),孕10周以上患者和對照者表達量無顯著差異。4.RSA患者CD56+CD16-細胞表面CD158a表達量顯著降低(P=0.026),按孕周分組分析顯示孕7周-10周患者CD56+C
14、D16-細胞表面表達CD158a較同期對照者顯著降低(P=0.010)。5.正常早孕蛻膜組織CD158a、CD158b與CD56表達呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論:1.CD56+CD16-細胞為蛻膜單個核細胞的優(yōu)勢細胞群,早孕蛻膜組織CD56+CD16-細胞減少可能為不明原因自然流產(chǎn)的發(fā)病機制之一。2。CD56+CD16-細胞表面CD158a表達下降可能與不明原因自然流產(chǎn)有關(guān)。3.正常早孕蛻膜單個核細胞CD158a、CD158b與CD56
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