共軛不飽和脂肪酸生物半合成法的初步研究.pdf

1、共軛不飽和脂肪酸是一類含有兩個以上共軛雙鍵的脂肪酸，具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、減脂、增強免疫、促進骨骼形成、抗糖尿病等豐富的藥理活性。其中，尤其以共軛亞油酸廣受關(guān)注。此外，產(chǎn)油微生物能產(chǎn)生并貯存質(zhì)量超過其細胞干重20％的微生物油脂，其脂肪酸組成與植物油脂相似，業(yè)已成為工業(yè)微生物領(lǐng)域的研究熱點之一。本文對共軛亞油酸的生物半合成法開展了初步的研究。 42株云南紅豆杉內(nèi)生真菌用于篩選產(chǎn)油菌株。首先，采用蘇丹Ⅳ染色法，光學顯微鏡觀察到1

2、8株含油菌株菌絲內(nèi)的被染成棕紅色的油脂滴。以Folch法提取測定初步篩選得到的菌株油脂產(chǎn)率。油脂產(chǎn)率達到15％以上的絲狀真菌有6株，其中菌株E1.3的油脂產(chǎn)率最高，達到25.2％。 為了增加E1.3油脂產(chǎn)量，考察了碳源、氮源、碳氮比、溫度、培養(yǎng)周期等因素的影響。優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基如下：60 g葡萄糖，2 g酵母浸粉，2 g硝酸鉀，2 g磷酸二氫鉀，0.2 g氯化鈉，0.4 g硫酸鎂，10 mL微量元素溶液及1 L水。優(yōu)化后的培養(yǎng)

3、條件為：100 mL液體培養(yǎng)基在250 mL搖瓶中，180 r/min，28℃培養(yǎng)6 d。在此條件下，生物量為10.4 g干菌絲/L，油脂含量為32.2％。 此外，恰當?shù)挠椭崛〔襟E對生產(chǎn)真菌油脂也有重要的影響。為了確定合適的真菌油脂提取工藝，選擇了6種破碎菌絲的方法和5種經(jīng)典的油脂提取方法進行試驗。結(jié)果表明：機械勻漿破碎菌絲的效果最佳，而Folch法優(yōu)于其它油脂提取方法。 氣質(zhì)聯(lián)用分析了E1.3菌油脂肪酸構(gòu)成，其中亞油