中原牡丹花黃酮的檢測、純化及抗氧化活性研究.pdf

1、牡丹為我國著名花卉，被稱為“萬花一品”、“冠絕群芳”的“花王”。黃酮類化合物是一類存在于自然界的、具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu)的化合物，具有廣泛的生物活性，其中最重要的是抗氧化活性。本文主要研究了中原牡丹花黃酮的比色測定方法，確定了大孔吸附樹脂法精制牡丹花黃酮的工藝條件，同時采用多種反應體系研究了中原牡丹花黃酮的抗氧化活性并對中原牡丹花中黃酮類化合物結(jié)構(gòu)進行了初步鑒定。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　（1）借助于紫外掃描，通過對氯化鋁顯色

2、法、硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法和直接測定法3種比色方法與高效液相色譜法測定結(jié)果的對比和方法評價的研究，確定了直接測定法（測定波長為350nm）是一種操作簡單、結(jié)果較準確的方法，以蘆丁為標準品，可用于中原牡丹花黃酮含量的快速測定。
　?。?）比較了21種大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附特性，篩選出了適合吸附中原牡丹花黃酮的樹脂，研究了牡丹花黃酮在大孔吸附樹脂上的動態(tài)吸附特性和解吸條件，并確定了牡丹花黃酮的適宜工藝條件。結(jié)果表明：藍深LS-303大

3、孔吸附樹脂對牡丹花黃酮有較好的吸附分離性能，吸附溶液的pH值為6.0，上樣濃度為6.92mg/mL，上樣流速為0.72mL/min，高徑比為10∶1，洗脫劑為90％的乙醇溶液，洗脫流速為0.72mL/min。牡丹花提取物中的黃酮經(jīng)藍深LS-303樹脂床吸附分離后，黃酮含量由12.17%提高到77.01%，回收率為96.6%。
　?。?）研究了中原牡丹花“大棕紫”花色素粗提物和經(jīng)大孔吸附樹脂純化的牡丹花黃酮在不同試驗體系中的抗氧化活

4、性。試驗結(jié)果表明，相同濃度條件下，牡丹花黃酮的還原力略低于抗壞血酸而顯著高于蘆丁，但粗提物的還原力比抗壞血酸和蘆丁都要低；牡丹花黃酮對DPPH·和HO·具有較強的清除能力，且在一定濃度范圍內(nèi)呈良好的量效關系，牡丹花黃酮、粗提物、Vc和蘆丁對 DPPH·的半清除濃度（EC50）分別為80.72μg/mL、287.74μg/mL、81.52μg/mL和141.45μg/mL，其中牡丹花黃酮與HO·反應的速率常數(shù)為8.521×107L·g-1

5、·s-1。在脂質(zhì)體氧化體系中，牡丹花黃酮可通過清除水溶性過氧自由基及脂過氧化自由基作用抑制小鼠肝勻漿和AAPH誘導的卵磷脂脂質(zhì)體氧化。
　?。?）采用高效液相色譜與二極管陣列檢測器和電噴霧電離質(zhì)譜聯(lián)用技術（HPLC-DAD-ESI-MS）分析了“洛陽紅”花瓣中黃酮化合物，初步確定了中原牡丹花中8個黃酮化合物的基本結(jié)構(gòu)，分別為：槲皮素-二糖苷（六碳糖+六碳糖）、山奈酚二糖苷（六碳糖+六碳糖）、異鼠李素二糖苷（六碳糖+六碳糖）、木犀草