SATB1與相關(guān)MicroRNA在乳腺癌中的表達(dá)研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分 SATB1在乳腺癌患者中的表達(dá)及其意義
　　目的:探討SATB1在乳腺癌患者中的表達(dá)及預(yù)后意義,并同目前臨床上常用4種標(biāo)記物Ki-67、c-erbB-2、ER及PR的預(yù)后意義進(jìn)行比較。
　　方法:篩選出的93例浸潤性導(dǎo)管癌患者標(biāo)本,用免疫組織化學(xué)染色方法評估SATB1的表達(dá)。SATB1與4種標(biāo)記物及臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析。SATB1的預(yù)后意義采用Kaplan-M

2、eier生存分析,log-rank檢驗(yàn)比較SATB1不同表達(dá)水平的組間差異,多因素分析運(yùn)用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型,利用受試者工作特征曲線(ROC)判斷SATB1、Ki-67、c-erbB-2、ER及PR作為預(yù)后指標(biāo)的敏感性和特異性。
　　結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,SATB1的亞細(xì)胞定位具有異質(zhì)性,SATB1陽性染色主要集中在細(xì)胞核,但也有細(xì)胞漿染色陽性。SATB1胞漿陽性和胞核陰性在各臨床病理參數(shù)間無顯著差異,二者作為預(yù)后判斷時(shí)統(tǒng)計(jì)

3、學(xué)意義無差別。SATB1的表達(dá)與臨床分期相關(guān)(p=0.002),與Ki-67呈正相關(guān)(p<0.001),與ER/PR呈負(fù)相關(guān)(p分別為0.025和0.045),而SATB1與c-erbB-2表達(dá)不相關(guān)(p=0.63)。在中位隨訪72個(gè)月時(shí),隨著SATB1表達(dá)強(qiáng)度的增加,乳腺癌患者的總生存期(OS)及無復(fù)發(fā)生存期(RFS)均縮短。在單因素和多因素分析中,只有SATB1顯著影響OS。將患者按不同的淋巴結(jié)狀態(tài)及諾丁漢預(yù)后指數(shù)(Nottingh

4、am Prognostic Index,NPI)劃分為不同的亞組,無論在淋巴結(jié)陰性組和淋巴結(jié)陽性組,預(yù)后良好組(NPI<3.4)和預(yù)后較差組(NPI≥3.4),均可依據(jù)SATB1表達(dá)的有無區(qū)分出不同的亞組人群。在ROC分析中, SATB1、Ki-67、c-erbB-2、ER及PR的曲線下面積(Area Under Curve,AUC)分別為0.859、0.662、0.637、0.586和0.498,提示 SATB1作為預(yù)后指標(biāo)的敏感性和

5、特異性最佳。
　　結(jié)論:核定位表達(dá)的SATB1是乳腺癌患者一個(gè)穩(wěn)健的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。
　　第二部分 miRNA與SATB1在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性研究
　　目的:本研究對可能調(diào)控SATB1表達(dá)的miRNA進(jìn)行預(yù)測,并在乳腺癌患者標(biāo)本中驗(yàn)證是否有候選miRNA調(diào)控SATB1的表達(dá)。
　　方法:選取4種權(quán)威的miRNA靶基因預(yù)測軟件TargetScan、PicTar、miRanda和miRDB,預(yù)測與SATB1 mRNA

6、3'-UTR有互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)的miRNA,將上述不同軟件預(yù)測的miRNA結(jié)果繪制成維恩圖,圖中交集部分為調(diào)控SATB1的候選miRNA。再用TaqMan實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測乳腺癌患者標(biāo)本中候選miRNA的表達(dá),并對miRNA和 SATB1的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:經(jīng)TargetScan、PicTar、miRanda及 miRDB軟件的預(yù)測,與SATB1的mRNA3'-UTR有互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)的miRNA分別有22種、24種、

7、76種及75種。將上述4種軟件預(yù)測結(jié)果制作維恩圖。圖中交集為6種miRNA,分別是miR-7、miR-21、miR-23a、miR-23b、miR-34a及miR-155。在乳腺癌患者標(biāo)本中,只有miR-34a的表達(dá)與 SATB1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(p<0.001),并且,隨著miR-34a表達(dá)的下調(diào),SATB1的蛋白表達(dá)水平呈上升趨勢。miR-7與SATB1的表達(dá)有負(fù)相關(guān)傾向(p=0.056),而SATB1和其余4種miRNA表達(dá)均不相關(guān)

8、。
　　結(jié)論:SATB1可能是miR-34a一個(gè)新的靶基因。miR-34a表達(dá)的下調(diào)削弱對SATB1的抑制,從而導(dǎo)致乳腺癌患者疾病進(jìn)展?；謴?fù)miR-34a的表達(dá)可能是那些SATB1高表達(dá)患者的潛在治療方法。
　　第三部分 乳腺癌患者M(jìn)IR34A啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化研究
　　目的:研究是否由MIR34A基因啟動(dòng)子的甲基化而引起成熟miR-34a的表達(dá)量下降。
　　方法:利用EpiTect Fast FFPE Bisu

9、lfite Kit試劑盒對石蠟包埋組織乳腺癌患者的基因組DNA進(jìn)行抽提及亞硫酸鹽修飾。通過甲基化特異PCR方法判斷MIR34A基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài),TaqMan實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測乳腺癌患者標(biāo)本中成熟miR-34a的表達(dá)。分析MIR34A基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與成熟miR-34a表達(dá)量之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:在55例可供分析的乳腺癌患者中,MIR34A基因啟動(dòng)子有16例(29％)為非甲基化,9例(16％)為甲基化,30例(55