細胞色素P450基因單核苷酸多態(tài)性對藥物安全性影響評價體系的建立和應(yīng)用.pdf

1、藥物的有效性和毒性主要取決于藥物在體內(nèi)的藥代動力學過程，包括藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄等步驟。這些步驟若發(fā)生改變將會影響到藥物的安全性。藥物基因組學研究表明，當與藥物相關(guān)的基因(如藥物代謝酶、轉(zhuǎn)運體和靶標的基因)發(fā)生變化后，將會改變藥物的藥代動力學過程，進而影響到藥物的安全性和療效。目前，對藥物代謝的研究較為清楚。很多藥物代謝酶已經(jīng)被鑒定出來，其中最重要的一類就是細胞色素P450(CYP)家族。
　　 CYP家族參與代謝

2、的藥物約占市場上銷售藥物的80％以上。這些酶的基因多態(tài)性已經(jīng)被證明可以影響藥物在體內(nèi)的清除和藥物的相互作用，因此會增加藥物不良反應(yīng)的風險。目前在人體中發(fā)現(xiàn)的CYP單核苷酸多態(tài)性(SNP)已經(jīng)多達1000多種，其中包括大量的非同義SNP(nsSNP)。這些nsSNP會導致表達氨基酸發(fā)生變化的CYP蛋白，因此很有可能會影響到這些CYP酶代謝藥物的活性。少數(shù)CYPnsSNP的功能已經(jīng)被證實可以引起藥物代謝活性的降低，它們的臨床效應(yīng)也已經(jīng)較好的

3、闡明。但是，大部分CYPnsSNP造成的影響還不清楚。由于缺乏有效的工具和手段，CYPnsSNP對藥物安全性的影響在藥物開發(fā)過程中還沒有能被很好的進行評估。
　　 為了彌補這個缺陷，本文建立了一套體外評估CYPnsSNP對藥物安全性影響的實驗體系。首先利用酵母表達了八種主要的CYP亞型和CYP3A4的17種多態(tài)性酶。利用這些重組CYP酶，選擇熒光探針底物建立了快速、可靠的生化試驗。進而檢測這些CYP酶的代謝活性和藥物對它們的抑制

4、能力，并預(yù)測其對藥物安全性的影響。利用這一實驗體系，本文對17種CYP3A4多態(tài)性酶的代謝活性，以及8種多態(tài)性酶對17種藥物抑制能力的影響進行了評估。結(jié)果發(fā)現(xiàn)9種CYP3A4多態(tài)性酶會導致其代謝活性的降低或完全喪失。導致活性降低的CYP3A4多態(tài)性酶也會影響大部分受測試藥物的抑制能力，使它們的抑制能力明顯減弱。
　　 此外，本文還利用建立的體系對一個新的候選藥物——丹參素冰片酯(DBZ)的體外代謝進行了研究。對比了DBZ經(jīng)過人和

5、大鼠肝微粒體代謝的異同，包括代謝動力學、代謝產(chǎn)物的比較，以及代謝產(chǎn)物的鑒定；還鑒定出了參與DBZ代謝的主要CYP酶，CYP2C8；DBZ主要抑制的CYP亞型，CYP3A4。在此基礎(chǔ)上，進一步研究了CYP2C8和CYP3A4的nsSNP對DBZ代謝和抑制能力影響。其結(jié)果顯示CYP2C8*3會導致DBZ代謝清除率下降54％；CYP3A4*2、CYP3A4*12和CYP3A4*16會導致DBZ抑制能力的減弱。這些結(jié)果可以幫助了解DBZ的作用機