神經(jīng)干細(xì)胞分化相關(guān)基因SHD11的克隆與功能研究.pdf

1、自從80年代初，Evans等發(fā)現(xiàn)小鼠胚胎干細(xì)胞以來(lái)，干細(xì)胞的研究越來(lái)越成為生物及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)研究的熱點(diǎn)。其研究技術(shù)及研究方向在不斷突破和擴(kuò)展。神經(jīng)系統(tǒng)在機(jī)體中的重要作用及其在成體損傷后修復(fù)困難等因素使得神經(jīng)干細(xì)胞研究在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域備受重視。神經(jīng)干細(xì)胞研究的發(fā)展為人類神經(jīng)疾病的臨床治療奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)，也為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療開(kāi)辟了新的途徑。 本實(shí)驗(yàn)室的前期工作發(fā)現(xiàn)基因SHD11在神經(jīng)干細(xì)胞和分化的神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)差異顯著。通過(guò)

2、RT-PCR我們克隆到此基因，并經(jīng)PCR去掉開(kāi)放讀框末端的終止密碼子之后將其克隆到哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pEGFP-C1和蛋白表達(dá)載體pPICZαA。組織差異表達(dá)分析表明其在小鼠神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量最高，成體小鼠大腦皮層最低，肝臟與脾臟介于二者之間，表達(dá)量相當(dāng)。通過(guò)轉(zhuǎn)染將SHD11導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)到了表達(dá)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其在神經(jīng)干細(xì)胞分化過(guò)程中抑制了細(xì)胞突起的形成，遂將SHD11導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)并使其蛋白得到了表達(dá)與鑒定。 以上實(shí)