HCV刺激鼠小膠質(zhì)細(xì)胞后TLR7和細(xì)胞因子的表達(dá)研究.pdf

1、目的:研究HCV陽性血清刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞BV2（BV2細(xì)胞）后，BV2細(xì)胞內(nèi)TLR7的表達(dá)變化，及其信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞因子IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)變化，探討TLR7在抗HCV免疫應(yīng)答中的作用機(jī)制和對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能的免疫發(fā)病機(jī)制。
　　方法:用含20％HCV的陽性血清刺激BV2細(xì)胞，在刺激后不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清液，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）、間接免疫熒光標(biāo)記的流式細(xì)胞術(shù)（FCM）及酶聯(lián)免疫吸附

2、法（ELISA）分別檢測(cè)TLR7mRNA、TLR7蛋白及IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)水平，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組和正常人血清組。多組均數(shù)間的比較采用方差分析。
　　結(jié)果:在BV2細(xì)胞中有TLR7mRNA和TLR7蛋白的表達(dá)；HCV刺激BV2細(xì)胞后，可誘導(dǎo)TLR7mRNA和TLR7蛋白表達(dá)水平升高，12h、24h、48hHCV陽性血清組較空白組及正常人血清組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；我們還觀察到TLR7mRNA和TL

3、R7蛋白隨時(shí)間延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì)，HCV陽性血清組培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的表達(dá)也呈遞增趨勢(shì)，IL-6在刺激后48h與正常人血清組及空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），TNF-α在刺激后24h、48h時(shí)與正常人血清組及空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），IFN-α在在刺激24h后表達(dá)低水平增高（P<0.05），但持續(xù)時(shí)間較短。
　　結(jié)論:HCV陽性血清刺激BV2細(xì)胞后，細(xì)胞胞體增大，表面的突起變短、增