Rab7對巨噬細(xì)胞中TLR7誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素的表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、作為模式識別受體中重要的一類受體，Toll樣受體可以識別大部分病原體的特定結(jié)構(gòu)成分和代謝產(chǎn)物。TLRs的正?；罨丝梢詥犹烊幻庖?，還可以啟動獲得性免疫，TLRs的異?；罨蛘哌^分活化可能引起類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫系統(tǒng)疾病。由于TLR7位于內(nèi)涵體膜表面，參與細(xì)胞內(nèi)吞過程，而激活TLR7信號通路需要有完整的細(xì)胞內(nèi)吞作用參與，因此我們推測Rab7可能對TLR7觸發(fā)的天然免疫應(yīng)答存在調(diào)控作用。
　　目的:研究Rab7

2、對TLR7信號通路的影響。
　　方法:利用Rab7過表達(dá)和Rab7突變(Rab7T22N)巨噬細(xì)胞RAW264.7，用TLR7配體R848刺激細(xì)胞6h，通過RT-PCR，Real-time PCR檢測IFN-α，IFN-β，IL-6，TNF-α，IP-10細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的變化。合成促使Rab7基因沉默的干擾序列，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞RAW264.7，通過定量PCR檢測轉(zhuǎn)染效率。R848刺激瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，通過Real-time

3、 PCR和Western blotting檢測上述細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的變化和TLR7信號通路中p-ERK，p-JNK，p-p38的磷酸化水平變化。
　　結(jié)果:在R848刺激作用下，巨噬細(xì)胞RAW264.7在6h時(shí)Rab7的mRNA表達(dá)水平最高。R848刺激后，Rab7的過表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞分泌的IFN-α，IFN-β，IL-6和TNF-α mRNA表達(dá)水平升高(p＜0.05或p＜0.01)，Rab7T22N過表達(dá)后細(xì)胞因子mRNA

4、的分泌量有所恢復(fù)，但是對IP-10的刺激作用不明顯。轉(zhuǎn)染Rab7-siRNA后，Rab7的mRNA表達(dá)量顯著降低(p＜0.05或p＜0.01)。IFN-α，IFN-β，IL-6和TNF-α的mRNA表達(dá)量顯著升高(p＜0.05或p＜0.01)。Rab7沉默后，ERK，JNK，p-38的磷酸化水平提高。
　　結(jié)論:Rab7可能是負(fù)向調(diào)控TLR7信號通路的蛋白，而且Rab7可以抑制R848誘導(dǎo)的TLR7信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的MAPKs信號通