對(duì)蝦免疫活性物質(zhì)作用效果及機(jī)制的初步研究.pdf

1、近年來，嚴(yán)重的暴發(fā)性養(yǎng)殖蝦類疾病，使我國(guó)水產(chǎn)業(yè)蒙受了巨大損失。在認(rèn)識(shí)到使用抗生素等藥物的負(fù)面影響后，人們己把注意力轉(zhuǎn)移到調(diào)動(dòng)或激活蝦類自身的免疫系統(tǒng)。對(duì)蝦的免疫機(jī)能與對(duì)蝦的健康密切相關(guān)。免疫增強(qiáng)劑能提高動(dòng)物的免疫機(jī)能，促進(jìn)動(dòng)物的健康，增強(qiáng)動(dòng)物的抗病力。 本試驗(yàn)分3個(gè)內(nèi)容進(jìn)行，莒在研究WSSV卵黃抗體[Ig-Guard(shrimp)]作為一種免疫增強(qiáng)劑，對(duì)中國(guó)對(duì)蝦、凡納濱對(duì)蝦的非特異性免疫及抗病毒能力的影響，及對(duì)克氏原螯蝦LD5

2、0的影響。 WSSV卵黃抗體提高中國(guó)對(duì)蝦抗白斑綜合征病毒感染力的研究：在基礎(chǔ)飼料中分別添加3個(gè)水平(1％、0.5％、0.1％)的Ig-Guard(shrimp)制成3種試驗(yàn)飼料，同時(shí)以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照，以P280 Premix為陽性對(duì)照。采用連續(xù)投喂的方法，飼喂中國(guó)對(duì)蝦(Penaeus chmemB)21d，分別測(cè)定了第7，14，21 d血淋巴的酚氧化酶(PO)、溶茵酶(U<,L>)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SO

3、D)活力，并對(duì)血藍(lán)蛋白進(jìn)行定量。結(jié)果顯示這些免疫指標(biāo)均能不同程度的被Ig-Guard(shrimp)促進(jìn)。在免疫試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，1％Ig-Guard(shrimp)組PO、U<,L>、SOD活力與空白對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)，ACP活力與空白對(duì)照組有顯著差異(P<0.05)；PO、U<,L>、SOD、ACP活力與陽性對(duì)照組均有顯著(P<0.05)或極顯著差異(P<0.01)。0.5％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-

4、Guard(shrimp)組的PO、ACP、SOD與空白對(duì)照組均有極顯著差異(P<0.01)，0.5％Ig-Guard(shrimp)U<,L>與空白對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)，0.1％Ig-Guard(shrimp)U<,L>與空白對(duì)照組有極顯著差異(P<0.01)；0.5％Ig-Guard(shrimp)組的U<,L>、ACP、SOD活力與陽性對(duì)照組有極顯著(P<0.01)或顯著差異(P<0.05)，PO活力與陽性對(duì)照組無顯著

5、差異(P>0.05)，0.1％Ig-Guard(shrimp)組的四種免疫因子活力與陽性對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)。在第21 d，用白斑綜合征病毒(WSSV)投喂感染。雖然感染后的11 d內(nèi)，免疫組對(duì)蝦和對(duì)照組對(duì)蝦均全部死亡，但是相對(duì)于對(duì)照組來說Ig-Guard(shrimp)對(duì)對(duì)蝦的死亡具有一定的延遲作用，尤其是低劑量攻毒時(shí)的0.1％劑量組，效果尤為明顯。但是在高劑量攻毒的情況下，Ig-Guard(shrimp)并沒有顯示出很

6、好的保護(hù)效果。 WSSV卵黃抗體對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫相關(guān)酶活力和抗病力影響的研究：在基礎(chǔ)飼料中分別添加3個(gè)水平(1％、0.5％、0.1％)的Ig-Guard(shrimp)制成3種試驗(yàn)飼料，同時(shí)以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照。采用連續(xù)投喂的方法，飼喂凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)20 d，分別測(cè)定了第5，10，15，20 d血淋巴的酚氧化酶(PO)、溶菌酶(U<,L>)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)及肌肉勻漿液的

7、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)等非特異性免疫因子活性，并對(duì)血清及肌肉勻漿液中蛋白進(jìn)行定量。結(jié)果表明，免疫組的PO、U<,L>、ACP、AKP、SOD、CAT活力均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。到免疫試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，1％Ig-Guard(shrimp)、0.5％Ig-Guard(shrimp)兩組的PO活力與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)，0.1％Ig-Guard(shrimp)組與對(duì)照組有顯著差異(P<0.05)；0.5

8、％Ig-Guard(shrimp)組U<,L>活力與對(duì)照組有顯著差異(P<0.05)，1％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-Guard(shrimp)兩組與對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)；1％Ig-Guard(shrimp)組ACP活力與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)，0.5％Ig-Guard(shrimp)和0.1％Ig-Guard(shrimp)組分別與對(duì)照組有顯著差異(P<0.05)和極顯著差異(P<0.01)

9、；1％Ig-Guard(shrimp)、0.5％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-Guard(shrimp)三組的AKP活力與對(duì)照組均有極顯著差異(P<0.01)；1％Ig-Guard(shrimp)、0.5％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-Guard(shrimp)三組的SOD、CAT活力與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)。免疫20 d后，用白斑綜合征病毒(WSSV)投喂感染。攻毒后第7 d各免疫組的相對(duì)

10、免疫保護(hù)率分別為17.95％、23.08％、35.90％。結(jié)果說明，Ig-Guard(shrimp)能有效提高對(duì)蝦免疫因子的活性，對(duì)于提高抗WSSV感染能力也有一定作用。 WSSV卵黃抗體保護(hù)克氏原螯蝦防御白斑綜合征病毒的研究：在基礎(chǔ)飼料中分別添加3個(gè)水平(1％、0.5％、0.1％)的Ig-Guard(shrimp)制成3種試驗(yàn)飼料，同時(shí)以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照。以克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)為模式動(dòng)物，采用

11、連續(xù)投喂的方法，免疫21 d后，用白斑綜合征病毒(WSSV)肌肉注射感染。注射相同稀釋濃度的螯蝦，其死亡率與添加Ig-Guard(shrimp)的劑量呈負(fù)相關(guān)，即添加Ig-Guard(shrimp)劑量越高，其死亡率越低：免疫組螯蝦的半數(shù)致死劑量(LD50)高于對(duì)照組的半數(shù)致死劑量，而且其效果隨著免疫劑量的增加而越來越明顯。結(jié)果說明，Ig-Guard(shrimp)能延遲螯蝦的死亡時(shí)間，在一定程度上對(duì)于提高抗WSSV感染能力有一定作用。

12、對(duì)于特異性免疫系統(tǒng)尚不明確的對(duì)蝦來說，信號(hào)識(shí)別蛋白在防御病原微生物過程中的作用尤為重要。到目前為止，已經(jīng)成功地從對(duì)蝦體內(nèi)分離出β-1，3-葡聚糖結(jié)合蛋白(βGBP)、脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)，但是始終沒有關(guān)于對(duì)蝦肽聚糖識(shí)別蛋白(PORP)的報(bào)道。我們之前的研究證實(shí)肽聚糖和Ig-Guard(shrimp)類似，也能夠激活對(duì)蝦體內(nèi)酚氧化酶系統(tǒng)的活性及其它非特異性免疫因子活性，提高抗病力，這意味著PGRP有可能在對(duì)蝦中存在。為了證明這一推測(cè)，