小鼠胚胎臍血管的造血功能研究.pdf

1、目的：臍血管是胚胎造血發(fā)育過程中一重要的造血器官，同AGM區(qū)，胎盤和胎肝類似，均可產(chǎn)生成體型造血干細(xì)胞，尤其是臍血管同AGM區(qū)一樣，都是最早的造血干細(xì)胞產(chǎn)生位點，且均為大血管組織。AGM區(qū)的造血發(fā)生和發(fā)育模式，近年來是眾多研究者關(guān)注的重點，包括其造血細(xì)胞的發(fā)育和調(diào)控等多個方面。然而，長期以來關(guān)于臍血管區(qū)各類造血干祖細(xì)胞的特征及其具體細(xì)胞來源卻仍有很多未知。我們的研究主要從臍血管區(qū)造血干細(xì)胞的的發(fā)生模式，造血祖細(xì)胞的發(fā)育特征，體外干、祖細(xì)

2、胞的維持等多個方面考察臍血管區(qū)造血發(fā)育的特征，從而發(fā)掘其造血發(fā)育上的特征，為全面揭示胚胎造血發(fā)育的本質(zhì)特征提供重要的理論依據(jù)。
　　 方法：我們的研究采用AGM區(qū)來源的血液血管干細(xì)胞模型，即優(yōu)化的BL-CFC模型，來考察臍血管區(qū)是否存在真正的血液血管干細(xì)胞；采用直接體外造血CFU-C分化來考察血液血管干細(xì)胞的髓系分化能力；采用與OP9基質(zhì)細(xì)胞共孵育的實驗方法考察其淋系造血分化能力；采用體外直接誘導(dǎo)或者借助OP9基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的方法

3、考察其血管分化特征。并且，我們用免疫磁珠分選的方法將臍血管區(qū)血液血管干細(xì)胞進行了細(xì)胞群體的定位。最后，采用組織塊培養(yǎng)的實驗方法考察了臍血管區(qū)各類造血干祖細(xì)胞的體外維持和擴增特征。
　　 結(jié)果：小鼠胚胎AGM區(qū)、臍血管和胎盤均可在體外分化產(chǎn)生各系造血祖細(xì)胞，總的CFC數(shù)目胎盤最多，其次是臍血管和AGM區(qū)。小鼠胚胎臍血管區(qū)細(xì)胞在體外半固體培養(yǎng)體系中，可以形成典型的Blast樣集落，形態(tài)特征與AGM區(qū)來源的BL-CFC相類似；這種典型

4、的Blast集落細(xì)胞用瑞氏一姬姆薩染色可見包含多個核漿比較高的原始細(xì)胞；流式細(xì)胞計數(shù)分析顯示：較早期造血祖細(xì)胞的CD31/c-Kit雙陽性細(xì)胞的比例為：32.5%；另外兩組造血祖細(xì)胞的標(biāo)志：Sca-1/CD45、CD31/CD45雙陽性細(xì)胞分別占：16.4%和41.2%；而較成熟一些的巨噬細(xì)胞(F4/80)和紅系(Ter-119)分化比例分別為：18.6%和33.3%；在體外可以分化產(chǎn)生各系造血CFU-C；在OP9基質(zhì)細(xì)胞上可以分化產(chǎn)生

5、B淋巴細(xì)胞；吞噬LDL，并且在OP9基質(zhì)細(xì)胞上可以形成CD31+或者endomucin+網(wǎng)絡(luò)狀血管樣結(jié)構(gòu)；體外誘導(dǎo)分化比較顯示：AGM區(qū)可以在OP9上形成70%的管樣結(jié)構(gòu)，而臍血管則只能形成25%的管樣結(jié)構(gòu)；臍血管區(qū)BL-CFC集落在胚胎近端和遠端的數(shù)目無差異；組織分析顯示：同樣可以產(chǎn)生造血集落的胎盤沒有BL-CFC的存在；細(xì)胞定位分析顯示臍血管區(qū)BL-CFC特異性表達Tie2而不表達PDGFRβ。體外組織塊孵育后的臍血管區(qū)仍然可以分化