HBV啟動子調(diào)控的肝細(xì)胞高表達(dá)載體構(gòu)建及抑癌作用研究.pdf

1、肝癌是最常見的惡性腫瘤之一,每年使大約100萬例病人死亡,盡管目前肝癌的治療方法很多,但仍未能從根本上改變病人的預(yù)后.近年來肝癌的基因治療已經(jīng)成為生物醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn).肝癌基因治療的靶向性調(diào)控,即調(diào)控目的基因特異性導(dǎo)入肝癌細(xì)胞或在肝癌細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)特異性表達(dá),最大限度地殺傷肝癌細(xì)胞的同時(shí)而不損傷正常肝細(xì)胞,已成為決定基因治療效果及可行性的關(guān)鍵因素.分子病毒學(xué)研究揭示了HBV的表達(dá)調(diào)控機(jī)制,為利用HBV嗜肝細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控特性構(gòu)建肝細(xì)

2、胞特異表達(dá)載體提供了條件.HBV基因組僅有3.2kb,結(jié)構(gòu)緊密,所有調(diào)控序列均位于蛋白編碼區(qū).HBV 3.5kb、2.4kb、2.1kb和0.9kb的RNA轉(zhuǎn)錄物的起始點(diǎn)附近各有一個(gè)啟動子,分別為C、SPⅠ、SPⅡ和X啟動子.另外在1074~1234位核苷酸和1627~1774位核苷酸處有HBV的兩個(gè)增強(qiáng)子ENⅠ和ENⅡ.該兩段序列具有高度保守性,并在其上有多個(gè)肝特異轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn),與ENⅠ結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子有肝細(xì)胞特異性的C/EBP、

3、HNF-4和HB<,1>F,與ENⅡ相結(jié)合的肝細(xì)胞蛋白因子有C/EBP、HNF-4、HLF、HNF3、FTF和E4BP4等.由于與HBV的啟動子和增強(qiáng)子特異結(jié)合的轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控因子幾乎只存在于肝細(xì)胞中,而不存在于其它細(xì)胞中,決策了肝細(xì)胞增強(qiáng)子ENⅠ和ENⅡ具有高度肝細(xì)胞專一性,其對HBV在肝細(xì)胞中的特異表達(dá)有相當(dāng)重要的貢獻(xiàn),并在一定程度上決策了HBV的嗜肝性.因此,以HBV病毒嗜肝細(xì)胞表達(dá)密切相關(guān)的啟動子、增強(qiáng)子為表達(dá)調(diào)控元件構(gòu)建肝細(xì)胞特

4、異表達(dá)載體攜帶只對腫瘤細(xì)胞起抑制或促調(diào)亡作用的治療基因?qū)肴梭w后,便可達(dá)到殺傷肝癌細(xì)胞而對正常肝細(xì)胞或非肝細(xì)胞無影響的目的,充分體出了基因治療的優(yōu)勢.據(jù)此,該論文擬進(jìn)行以下研究:(1)克隆不同的HBV啟動子片段,評價(jià)其在肝細(xì)胞和非肝細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄活性.篩選出在肝細(xì)胞中特異性表達(dá)最強(qiáng)的DNA序列組合形式.(2)構(gòu)建HBV啟動子調(diào)控的外源端粒酶hTRT反義RNA,apoptin,IL-24和OSM基因載體,并檢測各種治療基因在體內(nèi)外的抑癌作用