hVEGF-165基因修飾的MSCs修復犬股骨頭壞死及其轉(zhuǎn)歸.pdf

1、目的:研究hVEGF-165基因轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stemcells,MSCs)移植修復犬股骨頭壞死的效果及其轉(zhuǎn)歸。 方法:股骨頸截骨后固定的方法建立股骨頭壞死的動物模型，分為轉(zhuǎn)基因間充質(zhì)干細胞移植組、單純間充質(zhì)干細胞移植組和未治療組，每組9只動物(18側(cè)髖關節(jié))。脂質(zhì)體法將hVEGF-165和GFP基因共轉(zhuǎn)染進入犬骨髓間充質(zhì)干細胞。造模手術(shù)后10周，細胞植入股骨頭壞死區(qū)，轉(zhuǎn)基因和未轉(zhuǎn)基因的MSCs

2、隨機植入同一動物的左側(cè)或右側(cè)股骨頭。骨小梁定量分析細胞植入后第2、8和12周的股骨頭標本，結(jié)合X線和同位素斷層掃描的結(jié)果評價三組間成骨修復的差別；以修復組織中成環(huán)形的Ⅷ因子相關抗原陽性熒光為標志，比較12周時3組標本中的血管數(shù)量。在移植后第2、8和12周，計算標本中GFP與DAPI(4'，6'二脒基-2-苯吲哚鹽酸)陽性細胞的比例，以此判斷移植后MSCs存活的情況；激光共聚焦顯微鏡分析修復組織中GFP、骨鈣素和Ⅷ因子相關抗原免疫熒光的相

3、關性確定MSCs移植后的轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果:①造模手術(shù)后10周，手術(shù)側(cè)股骨頸斷端已愈合，但股骨頭均出現(xiàn)明顯的壞死。②第2周時，轉(zhuǎn)基因MSCs移植組、MSCs移植組和未治療組的骨小梁面積分數(shù)(％)分別為：33±4.0、18±3.3和8±2.6；第8周的結(jié)果(％)分別是67±4.3、43±4.0和15±2.9；第12周(％)是80±4.5、71±4.5和21±2.5。其間差別均具有統(tǒng)計意義(P<0.05)。③移植后12周，轉(zhuǎn)基因MSCs移

4、植組的X線表現(xiàn)為股骨頭形態(tài)規(guī)則，密度均勻；MSCs移植組中，股骨頭壞死區(qū)還有小范圍的密度不均勻或囊狀低密度區(qū)；在未治療組中還有較大的囊狀密度減低區(qū)和硬化骨的表現(xiàn)，但沒有塌陷；SPECT的結(jié)果與此相符。④12周時截骨面以上各組的血管數(shù)在轉(zhuǎn)基因MSCs移植組為27±6個，MSCs移植組為10±3個，未治療組為9±2個。轉(zhuǎn)基因MSCs移植組中血管數(shù)量的增加與其他兩組相比均具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)，MSCs移植組與未治療組的血管數(shù)量無統(tǒng)

5、計學差別(P=0.899)。⑤第2周時，轉(zhuǎn)基因MSCs移植組股骨頭標本中可見GFP陽性的細胞，其所占比例在第2周為15％±5％，第8周是22％±6％，第12周是38％±7％。在單純MSCs移植組和未治療組中沒有檢測到GFP陽性的細胞。⑥第2周時骨鈣素陽性細胞與GFP陽性共染的比例是85％±4％：第8周是是86％±6％；第12周時為90％±5％。所有標本中沒有發(fā)現(xiàn)Ⅷ因子相關抗原的免疫熒光與GFP共染。 結(jié)論:①股骨頸截骨后固定的方