環(huán)境雌激素聯(lián)合作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目前，環(huán)境雌激素(EnvironmentalEstrogens，EEs)對(duì)人類和野生生物的有害影響引起了許多國際組織和世界各國政府的關(guān)注，成為本世紀(jì)環(huán)境科學(xué)的重大議題之一。本課題擬優(yōu)化重組酵母測(cè)評(píng)系統(tǒng)(Recombinantyeastestrogensystem，RYES)并將其用于檢測(cè)幾類環(huán)境物質(zhì)的雌激素活性，在此基礎(chǔ)上利用該方法和子宮增重試驗(yàn)(UterusGrowthassay)，從體內(nèi)和體外兩個(gè)方面評(píng)價(jià)環(huán)境雌激素的聯(lián)合作用。

2、 重組酵母測(cè)評(píng)系統(tǒng)具有靈敏、簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景十分廣泛。目前該方法還處于繼續(xù)完善和發(fā)展階段，有必要對(duì)方法進(jìn)行優(yōu)化研究。本課題采用己烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)和壬基酚(4-nonyphenol，4-NP)作為受試物，研究振蕩與非振蕩、酵母擴(kuò)增時(shí)間、受試物作用時(shí)間(染毒時(shí)間)以及裂解方式等因素對(duì)雌激素活性的影響，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，并檢測(cè)多氯聯(lián)苯(PCBs)、異黃酮(Genistein，GS)、擬除蟲菊

3、酯農(nóng)藥、葛根粗提取物等幾類環(huán)境物質(zhì)的雌激素活性，以驗(yàn)證優(yōu)化后方法的穩(wěn)定性和實(shí)用性，促進(jìn)其推廣應(yīng)用。結(jié)果顯示：振蕩條件不會(huì)影響雌激素活性，酵母擴(kuò)增時(shí)間對(duì)雌激素活性有一定的影響，受試物作用時(shí)間和裂解方式對(duì)雌激素活性影響最大，運(yùn)用該方法檢測(cè)環(huán)境雌激素的優(yōu)化組合為：孵箱擴(kuò)增酵母30h，受試物作用時(shí)間30h，Y-PER裂解酵母細(xì)胞；優(yōu)化后的重組酵母測(cè)評(píng)系統(tǒng)可用于外源性化學(xué)物的初篩，在被檢測(cè)的環(huán)境物質(zhì)中，異黃酮和葛根粗提取物具有強(qiáng)雌激素活性，汽油燃

4、燒汽車尾氣具有弱雌激素活性，而其它受試物在本實(shí)驗(yàn)條件下均未檢出雌激素活性。 在子宮增重試驗(yàn)中，將雙酚A(BisphenolA，BPA)和己烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)以單獨(dú)和聯(lián)合的形式給予未成年SD雌性大鼠(21d)，通過觀察大鼠子宮濕重、子宮/體重比、子宮腔內(nèi)膜上皮高度、宮腔平滑肌厚度、宮腔腺體數(shù)量、陰道開口率和成熟卵泡數(shù)量來評(píng)價(jià)這兩種物質(zhì)的聯(lián)合雌激素效應(yīng)。結(jié)果顯示：將BPA和DES單獨(dú)給予未成年SD大

5、鼠后，它們均能使大鼠子宮增大，宮腔內(nèi)膜上皮高度和宮腔平滑肌厚度增加，宮腔腺體數(shù)量和成熟卵泡數(shù)量增加，表明BPA和DES均具有雌激素樣作用，且DES的雌激素活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于BPA，至少為BPA雌激素活性的10000倍；將BPA和DES以不同劑量聯(lián)合給予大鼠后，各聯(lián)合組與相應(yīng)劑量下受試物單獨(dú)作用之和相比，其子宮濕重、子宮/體重比、宮腔上皮高度和平滑肌厚度等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，說明在本實(shí)驗(yàn)條件下BPA和DES聯(lián)合后表現(xiàn)為相加作用。