CTLA-4基因多態(tài)性與Vogt-小柳原田綜合征及Behcet病相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分：CTLA—4基因多態(tài)性與Vogt—小柳原田綜合征的相關(guān)性研究 目的：Vogt—小柳原田(Vogt—Koyanagi—HaradaSyndrome，VKH)綜合征是一種累及全身多個系統(tǒng)、多個器官的自身免疫性疾病，典型表現(xiàn)為雙眼的全葡萄膜炎、白癜風(fēng)、脫發(fā)、毛發(fā)變白以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原—4(cytotoxicTlymphocyte—associatedantigen—4，CTLA—4)是一T細胞介

2、導(dǎo)免疫反應(yīng)的負性調(diào)節(jié)因子，研究發(fā)現(xiàn)其基因多態(tài)與多種自身免疫性疾病相關(guān)。本實驗的目的是探討CTLA—4基因的4個單核甘酸多態(tài)(SingleNucleotidePolymorphism，SNP)與中國漢族人群VKH綜合征的相關(guān)性。 方法：選擇中國漢族人群209例VKH綜合征患者和256例健康對照者，采集外周靜脈血2-5ml，抗凝處理，提取基因組DNA，運用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction，PCR)—限制

3、性片段長度多態(tài)性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP)的方法，檢測CTLA—4基因的4個SNP位點(-1661A/G，rs4553808；—318C/T，rs5742909；+49G/A，rs231775；及CT60，rs3087243)，用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，探討上述4個SNP的多態(tài)性與中國漢族人群VKH綜合征的相關(guān)性；用Haploview3.32軟件以這4個SNP位點

4、構(gòu)建CTLA—4基因單倍體型，并比較VKH綜合征和健康對照兩人群中CTLA—4個單倍體型的頻率差異。 結(jié)果： 1.CTLA—4基因+49G/A位點的G等位基因在VKH綜合征患者中的頻率顯著高于健康對照(71.6％vs62.8％，p=0.0046，pcorrected=0.037，OR=1.141)；該多態(tài)位點的基因型在VKH綜合征患者和健康對照中的頻率無差異(p=0.01，pcorrected=0.12)。 2.

5、CTLA—4基因CT60位點的G等位基因在VKH綜合征患者中的頻率較健康對照組升高(81.8％vs76.4％，p=0.043)，但經(jīng)Bonferroni校正后差異無統(tǒng)計學(xué)意義；該多態(tài)位點基因型的頻率在VKH綜合征患者和健康對照中的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.016，pcorrected=0.192)。 3.CTLA—4基因-1661A/G位點和—318C/T位點的等位基因及基因型頻率在VKH綜合征患者與健康對照中頻率的差異無統(tǒng)計學(xué)

6、意義。 4.利用Haploview3.32軟件以這4個位點構(gòu)建CTLA—4基因單倍體型，有3個單倍體型的頻率在VKH綜合征患者和/或健康對照中大于3％。單倍體型-1661A：—318C：+49G：CT60G在VKH綜合征患者和健康對照組中的頻率均最高，并且該單倍體型在VKH綜合征患者中的頻率顯著高于健康對照組(70.1％vs60.0％，p=0.0013，pcorrected=0.021，OR=1.565)。單倍體型-1661A：

7、—318C：+49A：CT60A在VKH綜合征患者中的頻率較健康對照低，但經(jīng)Bonferroni校正后差異無統(tǒng)計學(xué)意義(15.7％vs21.2％，p=0.0349，porrected=0.584，OR=0.701). 結(jié)論：CTLA—4基因SNP+49G/A位點的G等位基因和CTLA—4單倍體型-1661A：—318C：+49G：CT60G與VKH綜合征的易感性相關(guān)，提示CTLA—4的多態(tài)性與中國漢族VKH綜合征易感性相關(guān)。

8、 第二部分：CTLA—4基因多態(tài)性與Behcet病的相關(guān)性研究 目的：Behcet病是一種自身免疫性疾病，典型表現(xiàn)為復(fù)發(fā)性口腔潰瘍、生殖器潰瘍和復(fù)發(fā)性葡萄膜炎三聯(lián)征和皮膚病變的，是我國最常見和最重要的致盲性葡萄膜炎之一。本實驗的目的是探討CTLA—4基因的4個SNP與中國漢族人群Behcet病的相關(guān)性，并利用薈萃分析(meta—analysis)探討CTLA—4基因SNP+49G/A位點多態(tài)性與Behcet病的相關(guān)性。

9、 方法：選擇漢族人群228例Behcet病患者和207例健康對照者，采集外周靜脈血2-5ml，抗凝處理，抽提基因組DNA，運用PCR—RFLP檢測CTLA—4基因的4個SNP位點(-1661A/G，rs4553808；—318C/T，rs5742909；+49G/A，rs231775；和CT60，rs3087243)，用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，探討上述4個SNP的多態(tài)性與漢族人群Behcet病的相關(guān)性；用Haploview

10、3.32軟件以者這4個SNP位點構(gòu)建CTLA—4單倍體型，并在Behcet病和健康對照兩人群中比較CTLA—4個單倍體型頻率的差異。檢索CTLA—4基因多態(tài)與Behcet病相關(guān)性研究的文獻，利用薈萃分析評價CTLA—4基因SNP+49G/A位點多態(tài)性與Behcet病的相關(guān)性。 結(jié)果： 1.CTLA—4基因4個SNP多態(tài)(-1661A/G、—318C/T、+49G/A和CT60)的等位基因頻率和基因型的頻率在中國漢族Beh

11、cet病患者和健康對照組中的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 2.利用Haploview3.32軟件以這4個位點構(gòu)建CTLA—4基因單倍體型，有3個單倍體型的頻率在Behcet病患者和/或健康對照中大于3％。單倍體型-1661A：—318C：+49G：CT60G在Behcet病患者和健康對照組中的頻率均最高，但各個單倍體型的頻率在Behcet病患者中與健康對照組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.根據(jù)Medline檢索的3篇關(guān)于CTLA—4基因

12、SNP+49G/A多態(tài)與Behcet病相關(guān)性研究的文獻數(shù)據(jù)以及本實驗的數(shù)據(jù)，薈萃分析結(jié)果顯示所有4個實驗結(jié)果無異質(zhì)性(p=0.60，I2=0％)，CTLA—4基因SNP+49G/A多態(tài)性與Behcet病無相關(guān)性(overalleffects：Z=0.26，p=0.79)，集合危險系數(shù)(pooledOR)為0.98(0.83-1.15)。 結(jié)論：實驗研究提示CTLA—4基因多態(tài)性與漢族Behcet病無相關(guān)性。薈萃分析結(jié)果顯示CTL