成纖維細胞分化為成肌纖維細胞初步機理探討及對缺氧性肺動脈高壓的作用.pdf

1、目的：研究缺氧性肺動脈高壓(HPH)大鼠發(fā)病過程中無肌性肺動脈肌化的細胞來源，觀察缺氧誘導因子1α(HIF-1α)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)與轉化生長因子β1(TGF-β1)基因動態(tài)表達變化及與無肌性動脈肌化的關系，同時以人胚肺成纖維細胞為研究對象，研究缺氧和缺氧+TGF-β1對人胚肺成纖維細胞表型的影響。從而了解成肌纖維細胞在慢性阻塞性肺疾病(COPD)繼發(fā)缺氧性肺動脈高壓發(fā)病中的可能作用，為COPD肺動脈高壓發(fā)病機制提供新的理

2、論依據?！　》椒ǎ簞游锬Ｐ蛯嶒灒簩嶒灢捎贸旱脱鯊椭艸PH大鼠模型(10％O2，每天間斷缺氧8小時，共21天)，在缺氧3天、7天、14天和21天不同時間點及對照組用右心導管法測定大鼠平均肺動脈壓(mPAP)，稱量法計算右心室肥大指數(RVHI)，HE染色進行缺氧性肺小動脈重塑(HPSR)觀察。透射電鏡觀察外膜成肌纖維細胞和腺泡內血管壁細胞表型。原位雜交，免疫組化檢測HIF-1α、iNOS和TGF-β1在HPH進展過程中的mRNA和蛋白

3、動態(tài)變化及相互關系及其與mPAP，HPSR、RVHI的相關關系。細胞培養(yǎng)實驗：人胚肺成纖維細胞(KMB17)復蘇后取3-4代細胞作為實驗細胞。實驗分組：設計常氧組N(20％O2)；低氧組H(1％O2+5％CO2+平衡氮)；低氧+TGF-β1組H+T(1％O2+5％CO2+平衡氮，終濃度為5ng/mL)。免疫組化檢測α-SMA以確定KMB17是否發(fā)生表型轉化。　　結果：缺氧7天起大鼠mPAP、管壁面積/管總面積(WA％)、管腔面積/管總

4、面積(LA％)分別為(18.41±0.37)mmHg、(52.2±0.8)％、(47.8±0.8)％與對照組(14.02±0.41)mmHg、(64.5±1.3)％、(35.5±1.3)％比較差異有顯著性(P＜0.05)，缺氧14天起穩(wěn)定于高水平；缺氧14天RVHI為(25.0±1.8)％與對照組(23.6±0.5)％比較差異也有顯著性(P＜0.05)。(2)從缺氧7天開始無肌型動脈、部分肌型動脈、肌型動脈的構成比分別是39％、46％、

5、15％與對照組60％、35％、5％比較差異有顯著性(Px2＜0.005)。(3)免疫組化發(fā)現，腺泡內肺動脈管壁α-SMA的表達隨著低氧時間的延長，α-SMA表達量逐漸增多。(4)透射電鏡觀察21天組增厚的重塑血管壁，位于內外彈性膜之間的細胞為成肌纖維細胞表型，成肌纖維細胞含有特異性的微絲和豐富的粗面內質網，外層具有與它緊密聯(lián)系的成纖維細胞。(5)HIF-1αmRNA對照組，缺氧3和7天組均不明顯，缺氧14天增高(0.203±0.02，P

6、＜0.05)，并維持于高水平；HIF-1α蛋白在對照組表達不明顯，各缺氧組肺血管內膜均為陽性；在中膜，HIF-1α蛋白缺氧3天始增高(0.198±0.02，P＜0.05)，第7天達高峰(0.221±0.02，P＜0.05)，14天和21天下降。C組大鼠肺動脈中膜iNOS蛋白弱陽性(0.109±0.021)，H3組增高(0.225±0.030，P＜0.01)，H7組(0.312±0.036)穩(wěn)定于高水平。C組大鼠肺動脈壁iNOSmRNA弱

7、陽性(0.112±0.030)，H3組表達增強(0.245±0.036)，H7組達高峰(0.318±0.034，P＜0.01)并維持于高水平。TGF-β1蛋白在C組呈弱陽性(0.042±0.012)，H3組(0.198±0.031)表達增強，H7組達高峰(0.267±0.035，P＜0.01)，隨著缺氧時間延長，TGF-β1逐漸向基線水平回降；C組TGF-β1mRNA呈弱陽性表達(0.145±0.018)，H3、H7組表達增高不明顯(0

8、.163±0.021、0.176±0.026)，H14組增高(0.385±0.028，P＜0.01)，并維持于高水平，TGF-β1mRNA與TGF-β1蛋白于肺動脈中膜和外膜表達。(6)細胞培養(yǎng)表明：缺氧能夠刺激成纖維細胞發(fā)生表型轉化，TGF-β1能夠促進成纖維細胞表型轉化的發(fā)生。直線相關分析表明：HIF-1α、TGF-β1與iNOS均有相關性，且均與肺血管重塑指標相關?！　〗Y論：　　1、TGF-β1能夠誘導成纖維細胞轉化為成肌纖維