上皮干細胞與肌纖維母細胞標記物在胃癌發(fā)生發(fā)展中表達及意義.pdf

1、研究背景和目的：
　　 研究背景：腫瘤組織由腫瘤細胞和間質組成，腫瘤干細胞學說認為腫瘤組織中存在極少量腫瘤細胞充當干細胞角色，具有自我更新、增殖能力及多向分化潛能，產(chǎn)生不同表型的腫瘤細胞，使腫瘤在體內不斷擴大，或形成新的腫瘤。胃上皮干細胞異常分化可以導致胃癌發(fā)生，研究正常和異常上皮干細胞生物學特點，有助于揭示胃癌的起源。肌纖維母細胞是一種超微結構介于平滑肌細胞和纖維母細胞之間的特殊類型細胞，能夠產(chǎn)生大量上皮生長因子，被認為是最為

2、重要的一類間質細胞，但在胃癌發(fā)生過程中的變化尚不清楚。按胃癌起源，Lauren將其分為腸型和彌漫型，腸型和彌漫型胃癌臨床病理的差別可能源于其上皮干細胞的數(shù)量和基因差異。多數(shù)惡性腫瘤的結構成分中約一半是間質，腫瘤相關肌纖維母細胞在胃癌進展中可能起作用。因此本研究目的包括：
　　 1、觀察胃上皮干細胞標記物Musashi-1和間質肌纖維母細胞標記物α-SMA在正常胃粘膜、增生性息肉、腸化生、上皮內瘤變、胃癌中的表達變化，分析Musa

3、shi-1、α-SMA與增殖細胞核抗原(PCNA)的關系，探討上皮干細胞和間質肌纖維母細胞在胃癌發(fā)生過程中的變化，及與細胞增殖活性和癌變可能機制的關系。
　　 2、比較腸型和彌漫型胃癌Musashi-1、PCNA和α-SMA表達，并觀察具有降解細胞外間質作用的基質金屬蛋白酶-7(MMP-7)和具有促進增殖作用的胰島素樣生長因子-2(IGF-2)在腸型和彌漫型胃癌中表達的差別，探討腸型和彌漫型胃癌中腫瘤干細胞和肌纖維母細胞的差異及

4、與胃癌侵襲、轉移的關系。
　　 研究方法：
　　 1、收集2008年9月至2010年8月間山東大學齊魯醫(yī)院內鏡室胃鏡活檢及普外科手術的胃竇標本，其中胃鏡活檢標本182例，包括：正常胃粘膜(炎癥均為輕度以下)21例，增生性息肉32例，腸上皮化生31例，低級別上皮內瘤變57例，高級別上皮內瘤變41例；胃癌50例來自病理科手術切除標本，術后病理均證實為腺癌。標本經(jīng)10％多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。采用微波

5、EDTA抗原修復法，采用兩步法免疫組化方法檢測干細胞標記物Musashi-1、肌纖維母細胞標記物α-SMA，并與PCNA表達進行相關性分析。
　　 2、收集50例胃癌手術切除標本患者的臨床病理資料，包括患者年齡、性別、Lauren分類、腫瘤大小、TNM分期等，采用免疫組化方法檢測胃癌組織中Musashi-1、α-SMA、PCNA、MMP-7、IGF-2表達，比較腸型胃癌和彌漫型胃癌表達情況，并與患者臨床病理資料進行比較分析。

6、r>　　 結果：
　　 1.正常胃粘膜PCNA和Musashi-1陽性細胞局限于胃腺頸部的增殖區(qū)，增生性息肉中PCNA表達高于正常胃粘膜(U=164.00，P<0.01)，卻極少發(fā)現(xiàn)Musashi-1陽性細胞。腸化生粘膜Musashi-1表達較正常胃粘膜升高(U=227.50，P<0.05)，其PCNA表達較增生性息肉也升高(U=108.00，P<0.01)。腸化生和低、高級別上皮內瘤變中PCNA、Musashi-1表達無顯著

7、性差異。胃癌中Musashi-1表達比高級別上皮內瘤變升高(U=789.00，P<0.05)，PCNA表達比高級別上皮內瘤變也升高(U=650.00，P<0.01)。Musashi-1和PCNA表達呈正相關(rs=0.34 P<0.01)。
　　 2.α-SMA陽性細胞在正常粘膜和增生性息肉中散在無規(guī)律地分布于腺體之間，在增生性息肉中略有增高(U=276.00，P>0.05)；在腸化生粘膜中α-SMA陽性細胞較增生性息肉顯著增高

8、(U=256.00，P<0.01)，并且在腸化腺體的周圍呈包裹腺體樣分布；在上皮內瘤變中α-SMA表達也呈腺體周圍模式，但明顯不如腸化生粘膜顯著和規(guī)則，并且低、高級別上皮內瘤變較腸化生粘膜中α-SMA陽性細胞數(shù)量呈下降趨勢(x2=6.42，P<0.05)；胃癌中α-SMA陽性細胞不再呈腺周分布模式，而是在癌巢間呈無規(guī)律的小片狀分布或團塊狀、條索狀分布；胃癌中α-SMA表達比上皮內瘤變顯著增高(U=600.00，P<0.01)，較腸化生粘

9、膜略增高(U=624.50，P>0.05)。α-SMA和PCNA表達呈正相關(rs=0.39 P<0.01)。
　　 3.Musashi-1表達在彌漫型胃癌比腸型胃癌升高(x2=16.96，P<0.01)，Musashi-1表達在胃癌有淋巴結轉移組比無淋巴結轉移組升高(x2=13.45，P<0.01)，在胃癌Ⅱ-Ⅳ期組比Ⅰ期組升高(x2=11.88，P<0.01)；α-SMA表達在腸型胃癌和彌漫型胃癌無顯著性差異(x2=2.98

10、，P>0.05)，α-SMA表達與腫瘤浸潤深度密切相關，在胃癌T2-4組比<=T11升高(x2=11.38，P<0.05)，在胃癌有淋巴結轉移組比無淋巴結轉移組升高(x2=9.67，P<0.05)，在胃癌>5cm組比<=5cm組升高(x2=9.79，P<0.05)。
　　 4、彌漫型胃癌中PCNA、MMP-7表達較腸型胃癌升高(x2=6.52，P<0.05；x2=19.54，P<0.01)，彌漫型胃癌IGF-2多表達在細胞核(2

11、1/23)，腸型胃癌IGF-2多表達在細胞漿中(24/27)，兩者有顯著性差異(x2=32.00，P<0.01)。PCNA高表達與胃癌淋巴結轉移、腫瘤大小有關；MMP-7高表達與胃癌浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、分期有關；IGF-2細胞核表達與胃癌浸潤深度、淋巴結轉移、分期有關。
　　 結論：
　　 1.在胃增生性息肉，上皮干細胞增殖有限并分化為大量上皮細胞，PCNA表達增強，但Musashi-1表達隨干細胞分化迅速下

12、降，提示良性病變中上皮干細胞自我復制被控制在有限范圍內。
　　 2、腸化生上皮與低、高級別上皮內瘤變有相似的上皮干細胞增殖活性。腸上皮化生粘膜中的Musashi-1陽性細胞可能是腸化生-上皮內瘤變-腺癌發(fā)生途徑的始動環(huán)節(jié)中的早期事件，上皮干細胞自我復制過程失調導致干細胞擴增可能在胃癌發(fā)生過程的早期事件中起關鍵作用。
　　 3、胃癌中Musashi-1、PCNA表達比癌前病變均增高，提示胃癌干細胞較癌前病變中干細胞具有更強

13、增殖能力。
　　 4、胃癌惡性轉化過程中肌纖維母細胞不但有數(shù)量變化，還有分布模式和位置的改變。從正常粘膜到腸化生粘膜，肌纖維母細胞逐漸增多，并且在腸化腺體形成腺周包裹式的表達模式；但是從腸化生粘膜到低、高級別瘤變，肌纖維母細胞又逐漸減少并且腺周表達模式弱化；胃癌中腺周肌纖維母細胞消失，而被腫瘤相關肌纖維母細胞代替并呈雜亂無章分布，這表明在胃癌發(fā)展不同階段，肌纖維母細胞功能具有異質性。在癌前病變中的腺周肌纖維母細胞可能具有早期防御

14、功能，腫瘤相關肌纖維母細胞具有促進胃癌侵襲和轉移的作用。腸型與彌漫型胃癌的間質肌纖維母細胞無顯著差別。胃癌的惡性轉化過程為上皮細胞和間質肌纖維母細胞的共同作用。
　　 5、胃癌中Musashi-1過表達可能促進癌干細胞自我復制，Musashi-1陽性細胞在胃癌侵襲轉移中起主導作用。彌漫型胃癌干細胞可能比腸型胃癌具有更高的增殖能力，并可能與彌漫型胃癌分化較差有關。
　　 6.胃癌細胞的MMP-7高表達及IGF-2細胞核表達