白介素10基因治療肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：利用HEK293細(xì)胞擴(kuò)增攜帶IL-IO基因的重組復(fù)制缺陷型腺病毒(AdIL-10)，通過體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究IL-10基因在肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell，HSC)活化、增殖中的作用及對大鼠肝纖維化的影響，進(jìn)一步闡明IL-10基因在治療實(shí)驗(yàn)性肝纖維化中的作用，為IL-10基因治療肝纖維化可行性的研究提供一定的依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法：利用HEK293細(xì)胞獲得高滴度AdlL-10，同時(shí)觀察其在體外實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)

2、。采用AdlL-10感染原代培養(yǎng)的HSC和HL-7702細(xì)胞，通過體外實(shí)驗(yàn)觀察外源性大鼠IL-IO基因?qū)SC及肝細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。將IL-10基因?qū)敫卫w維化大鼠體內(nèi)，以初步探討IL-10基因體內(nèi)導(dǎo)入對實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的治療作用。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：獲得4x10<'12>pfu／ml的AdlL-10。AdlL-10導(dǎo)入細(xì)胞后，細(xì)胞中IL-10 mRNA及蛋白水平均明顯升高。IL-10基因?qū)氪笫驢SC可抑制a-平滑肌肌動蛋白(a-s

3、mooth muscle actin，a-SMA)、細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1)和轉(zhuǎn)化生長因子-B1(transforming growth factor beta，TGF-B1)的表達(dá)，并可抑制腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor a，TNF-a)和血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor，PDGF)的

4、作用；降低HSC培養(yǎng)上清細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)水平；抑制HSC的增殖，但對肝細(xì)胞的增殖無明顯影響。IL-10基因?qū)氪笫篌w內(nèi)可明顯上調(diào)肝組織中IL-10的表達(dá)；下調(diào)a-SMA、TNF-a和TGF-131的表達(dá)；肝組織中Ⅰ型、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)下降；肝功能指標(biāo)趨于好轉(zhuǎn)；血清及肝組織中肝纖維化指標(biāo)降低；肝組織學(xué)結(jié)構(gòu)得到改善，肝臟纖維化程度降低。 結(jié)論：利用HEK293細(xì)胞可以獲得高滴度的