黃芪、水蛭、大黃及其復方影響大鼠MsC產(chǎn)生FN及Bax、Bcl-2的研究.pdf

1、　　目的 以黃芪、水蛭、大黃及其復方(黃芪、水蛭、大黃、黨參、川芎)具有代表性藥物作為研究對象,以系膜細胞增生作為作用的靶點,以在腎臟病發(fā)生發(fā)展中具有代表性的、學術界公認的分子生物學指標 FN 和凋亡調(diào)控基因 Bax、Bcl-2為檢測目標。觀察黃芪、水蛭、大黃及復方含藥血清對脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導下體外培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細胞(Mesangial Cells,MsC)表達纖維連接蛋白(fibrone

2、ctin,FN) 的強弱,對凋亡調(diào)控基因 Bax、Bcl-2 的影響和促進MsC凋亡作用的強弱。
　　方法 在大鼠原代腎小球系膜細胞體外培養(yǎng)的基礎上,利用 LPS誘發(fā)大鼠腎小球系膜細胞增生的模型。采用 ELISA 法檢測黃芪、水蛭、大黃及其復方對 MsC 表達FN的影響,實驗中將系膜細胞分為九組：控制組、模型組、對照組、黃芪組、水蛭組、大黃組、雷公藤多甙組,復方組、復方+雷公藤多甙組；采用免疫組化法檢測凋亡調(diào)控基因 Bax、Bc

3、l-2,并測得凋亡細胞數(shù),實驗中將系膜細胞分為七組：對照組、黃芪組、水蛭組、大黃組、雷公藤多甙組,復方組、復方+雷公藤多甙組；并經(jīng)高效液相色譜檢測大鼠血漿中是否含有黃芪、大黃、水蛭、雷公藤多甙片的主要成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷、大黃酸和大黃素、次黃嘌呤、雷公藤甲素。
　　結(jié)果 在抑制MsC產(chǎn)生FN方面：水蛭組抑制作用強于黃芪組和大黃組,有顯著性差異(P<0.05)；大黃組與黃芪組相比,優(yōu)于黃芪組,有顯著性差異；水蛭組與雷公藤多甙組和

4、復方組作用相近,三者比較無顯著性差異；復方+雷公藤多甙組作用最佳,與其他各組相比均有顯著性差異(P<0.05)。免疫組化法標記MsC的凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2方面：標記出含促凋亡蛋白Bax的細胞率上水蛭組和大黃組明顯高于黃芪組,有顯著性差別( P<0.0024)；復方組標記出含促凋亡蛋白Bax的細胞率與單味中藥組相比,高于單味中藥組,有顯著性差異( P<0.0024)；以復方+雷公藤多甙組標記出含促凋亡蛋白 Bax 的細胞率最高；

5、而各含藥血清組在標記出含抑制凋亡蛋白 Bcl-2的細胞率與Bax大致相反。各含藥血清組MsC凋亡率之間的比較：水蛭組和大黃組明顯優(yōu)于黃芪組,有顯著性差別( P<0.0024)；復方組與單味中藥組相比,均優(yōu)于單味中藥組可明顯促進系膜細胞凋亡,有顯著性差別(P<0.0024),以復方+雷公藤多甙組作用最佳,與其他各組相比均有顯著性差異(P<0.0024)。經(jīng)高效液相色譜測定大鼠血漿中含有黃芪、大黃、水蛭、雷公藤多甙片的主要成分毛蕊異黃酮葡萄

6、糖苷、大黃酸和大黃素、次黃嘌呤、雷公 藤甲素。
　　結(jié)論 各含藥血清組均能明顯降低經(jīng)LPS刺激后體外培養(yǎng)的大鼠MsC產(chǎn)生FN的含量,以復方+雷公藤多甙組作用最佳,水蛭組抑制作用較強,優(yōu)于黃芪組；在促進大鼠 MsC凋亡方面,仍以復方+雷公藤多甙組作用最佳,水蛭組和大黃組作用較強,優(yōu)于黃芪組。得出活血化瘀水蛭在抑制系膜細胞增生,促進系膜細胞凋亡方面效果優(yōu)于益氣類中藥黃芪,也間接說明治療系膜增生性腎小球腎炎以復方+雷公藤多甙效果最優(yōu)。