不同分子流行病學(xué)技術(shù)對結(jié)核分枝桿菌分型意義的比較性研究.pdf

1、我們研究的目的是對359株結(jié)核分枝桿菌分別應(yīng)用4種基因分型方法進(jìn)行分型,就其分辨率及穩(wěn)定性進(jìn)行比較,選擇出一種適合中國國情的結(jié)核分枝桿菌基因分型的方法,廣泛應(yīng)用于流行病學(xué)研究,更有效地預(yù)防和控制結(jié)核病在中國的傳播和流行.材料和方法一、研究的標(biāo)本359株結(jié)核分枝桿菌菌株,165株來自于1997年山東省結(jié)核菌耐藥檢測,30個縣結(jié)防所提供的結(jié)核分枝桿菌菌株,115株是2001年費(fèi)縣和沂水兩個縣結(jié)防所提供的結(jié)核分枝桿菌菌株,培養(yǎng)基是酸性改良羅氏

2、培養(yǎng)基,79株是山東省胸科醫(yī)院臨床微生物實驗室提供的結(jié)核分枝桿菌菌株,培養(yǎng)基是12B液體培養(yǎng)基.二、方法1、提取DNA:在BSL3實驗室,嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行.2、IS6110指紋圖譜法.3、標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)核分枝桿菌MIRU-VNTR分型法.4、準(zhǔn)的結(jié)核分枝桿菌Spoligotyping分型法.5、主要基因組(major genetic group)分型法.6、Hsp65菌型鑒定.研究結(jié)果1、359株結(jié)核分枝桿菌通過MIRU分型法得出結(jié)果:M

3、IRU分型法鑒定出111種基因型,70種獨特型,41個Clusters,簇的大小范圍為2-114株菌株,最廣泛的菌株是山東簇(N=114,31.75%),MIRU Genetype是223325173533.2、359株結(jié)核分枝桿菌通過Spoligotyping分型技術(shù)得出結(jié)果:Spoligotyping鑒定出33種基因型,22種獨特型,11個Clusters,簇的大小范圍為2-300株菌株,最廣泛流行菌株是北京家族(N=300,83.

4、57%),Spoligotyping是0000 0000 0003 771.3.、IS6110 RFLP指紋圖譜分型結(jié)果:359株結(jié)核分枝桿菌,只有352株有指紋圖譜結(jié)果,7個菌株沒有拷貝數(shù),用Hsp65基因測序的方法鑒定為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合物.IS6110 RFLP指紋圖譜帶按照100%完全相同定義為一簇(Cluster),352株菌株鑒定出312種基因型,284種獨特型,28個Clusters,簇的大小范圍為2-4株菌株,IS6110

5、 RFLP指紋圖譜帶按照90%相似性定義為一簇(Cluster),352菌株鑒定出167種基因型,93種獨特型,74個Clusters,簇的大小范圍為2-21株菌株,4、流行病學(xué)聯(lián)系與分型結(jié)果比較:11株有流行病學(xué)聯(lián)系的菌株,MIRU分型法11株結(jié)核分支桿菌分別屬于4個Clusters,而IS6110RFLP分型法則只有4株菌屬于一個Cluster,其它菌株至少有一條帶的差別(2-3條).11株菌株9株Spoligotyping編碼是0