亞硒酸鈉誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡過(guò)程中MnSOD上調(diào)機(jī)制的研究.pdf

1、博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：l0023B2007211亞硒酸鈉誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡過(guò)程中MnSoD上調(diào)機(jī)制的研究所院：姓名：指導(dǎo)教師：學(xué)科專(zhuān)業(yè)：研究方向：完成日期：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所李竹石許彩民生物化學(xué)與分子生物學(xué)細(xì)胞凋亡與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)2010年4月(endoplaSmicreticul啪s仃ess，ERs仃ess)凋亡通路。為了詳細(xì)闡明NB4細(xì)胞在亞硒酸鈉誘導(dǎo)凋亡的過(guò)程中發(fā)生的分子生物學(xué)變化，我們?nèi)匀恍枰M(jìn)行更深入的探索。本研究在前期工作的基礎(chǔ)

2、上，進(jìn)一步探討了在亞硒酸鈉誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡過(guò)程中，一些受到活性氧調(diào)節(jié)的重要分子的變化情況、調(diào)節(jié)通路及其對(duì)凋亡的意義，重點(diǎn)對(duì)關(guān)鍵抗氧化酶MnSOD(maIlgallesesuperoxidedismutaSe)進(jìn)行了研究。經(jīng)Westembolt發(fā)現(xiàn)，亞硒酸鈉在誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡的同時(shí)引起了MnSOD的顯著上調(diào)，活性氧清除劑MnTMPyP完全阻斷該上調(diào)效應(yīng)，提示活性氧是其上游調(diào)控因素。經(jīng)不同活性氧探針檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，亞硒酸鈉作用后誘導(dǎo)兩種細(xì)胞內(nèi)

3、活性氧超氧自由基(superoxidemdical)與過(guò)氧化氫(hydrogenperoxide)迅速而顯著的升高，其中超氧自由基可能對(duì)于MnSOD的上調(diào)起主要作用。就具體通路而言，蛋白激酶ERK(extracellularsigml—regulatedhnaSe)與轉(zhuǎn)錄因子p53是活性氧介導(dǎo)MnSOD上調(diào)的關(guān)鍵因素。cDNA測(cè)序結(jié)果證明本研究使用的NB4細(xì)胞表達(dá)野生型的p53。經(jīng)Westemblot檢測(cè)核蛋白提取物和免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，

4、亞硒酸鈉誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生活性氧后，活性氧促使E砌Q從胞質(zhì)轉(zhuǎn)位至核內(nèi)，磷酸化p53的關(guān)鍵位點(diǎn)Serl5。免疫共沉淀結(jié)果顯示，ERIQ在核內(nèi)通過(guò)直接作用的方式磷酸化p53。采用該方法還發(fā)現(xiàn)，在未經(jīng)亞硒酸鈉作用的NB4細(xì)胞的核內(nèi)，p53與其抑制性蛋白MDM2(mousedoublemimlte2)處于結(jié)合狀態(tài)，而經(jīng)亞硒酸鈉處理后，核內(nèi)p53被EIⅨ磷酸化，從而與MDM2解離而被激活。采取p53選擇性抑制劑Pifi恤ina(PFT)抑制其轉(zhuǎn)錄活性，