RNA干擾β-catenin對大腸腺癌細胞SW480生長及基因表達的研究.pdf

1、目的:以β-catenin為靶向，化學合成siRNA轉染大腸腺癌細胞SW480，觀察其對β-cateninmRNA表達及對細胞增殖和凋亡的影響。了解其對SW480細胞生長作用的影響。 方法:以β-catenin為靶向，化學合成三條不同的siRNA鏈，將合成的三條siRNA鏈及無意義鏈分別用脂質體轉染SW480細胞，分組為siRNAl試驗組、siRNA2試驗組、siRNA3試驗組、陰性對照組(無意義鏈組)、空白對照組五組；應用四甲

2、基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測24小時、48小時、72小時三個時段SW480細胞增殖狀態(tài)。采用流式細胞術檢測siRNA轉染作用后48小時SW480細胞凋亡率及細胞周期變化。利用熒光定量PER法(探針)測定siRNA轉染作用后48小時β-catenin mRNA表達的變化。 結果: 1．MTT法檢測： siRNA1試驗組、siRNA2試驗組、siRNA3試驗組與陰性對照組及空白對照組相比，SW480細胞增殖抑制率均明顯增高

3、，其中，siRNA1試驗組、siRNA3試驗組增殖抑制率比siRNA2試驗組高，siRNA1、siRNA3對靶基因的特異性優(yōu)于siRNA2。研究發(fā)現(xiàn)實驗各組增殖抑制率具有時間依賴性，隨時間延長，增值抑制率均有不同程度增高。 2．流式細胞術檢測：siRNA轉染作用后48小時siRNA1試驗組、siRNA2試驗組、siRNA3試驗組與陰性對照組及空白對照組相比，SW480細胞凋亡率明顯增高。其中siRNA1試驗組、siRNA3試驗組

4、的凋亡率比siRNA2試驗組高，說明前兩組siRNA干擾抑制作用比后者強。檢測發(fā)現(xiàn)siRNA1試驗組、siRNA2試驗組、siRNA3試驗組與陰性對照組及空白對照組相比，細胞周期阻滯在G1期，G1期延長，S期縮短。 3．熒光定量PCR法(探針)檢測：siRNA轉染作用后48小時siRNAl試驗組、siRNA2試驗組、siRNA3試驗組與陰性對照組及空白對照組相比，β-catenin mRNA的表達明顯降低。siRNAl試驗組、s