生物可降解性藥物緩釋支架下肢缺血血運(yùn)重建研究.pdf

1、第一部分：
　　 在缺血局部持續(xù)穩(wěn)定的釋放外源性生長因子，如重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(rhbFGF)是治療心肌缺血性疾病或下肢缺血性疾病的有效方法。thbFGF穩(wěn)定性差易失活，制備過程須嚴(yán)格控制以維持其活性。在本研究中，我們制備了雙層支架，內(nèi)層為螺旋鎂(Mg)，外層為包載thbFGF的高分子聚合物聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)。我們研究了此雙層支架在促進(jìn)下肢缺血大鼠模型血管新生方面的作用。
　　 牛血清白蛋白(B

2、SA)被用作模擬藥物，體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)表明，BSA可以緩慢持續(xù)釋放4周。在磷酸鹽緩沖液(PBS)中孵育時(shí)間為4周時(shí)，Mg-PLGA支架中釋放的BSA的量為75.29±1.33％，而PLGA支架中釋放的BSA的量僅為54.73±2.89%。通過光譜法（紫外可見分光光譜UV-Vis，熒光光譜，圓二色譜CD）研究不同濃度的Mg2+對BSA結(jié)構(gòu)、構(gòu)型的影響，結(jié)果表明BSA的二級結(jié)構(gòu)并未受到影響。同時(shí)，我們研究了支架體外降解行為，通過掃描電鏡觀察

3、支架表面形貌的變化，分析了不同時(shí)間點(diǎn)支架的降解百分比以及腐蝕溶液pH值的變化。
　　 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，與PLGA-rhbFGF支架相比，Mg-PLGA-rhbFGF支架對血管平滑肌細(xì)胞(SMC)有更低的毒性，更能促進(jìn)細(xì)胞的增殖與遷移。在體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)中，我們制備了大鼠下肢缺血模型，機(jī)械打孔后置入支架。術(shù)后2、4、6周，取支架周圍組織進(jìn)行分析。HE染色及CD31+免疫組織化學(xué)染色顯示：Mg-PLGA-rhbFGF支架中釋放的thb

4、FGF更能促進(jìn)下肢血管的新生。支架置入6周，Mg-PLGA-rhbFGF支架組的血管密度為85.3±10.1(number/mm2)，明顯高于PLGA-rhbFGF支架組(71.0±5.6)(number/mm2)和對照組(8.7±0.6)(number/mm2)，p＜0.01。Mg-PLGA-rhbFGF和PLGA-rhbFGF支架組的血流灌注恢復(fù)分別達(dá)到99.08±0.029%和80.68±0.032%，而對照組缺血下肢血流基本上未

5、恢復(fù)。支架置入組大鼠體內(nèi)Mg2+濃度在正常范圍內(nèi)，血常規(guī)及內(nèi)臟病理學(xué)檢測均正常，表明我們制備的支架具有良好的生物相容性。
　　 葛根素是從豆科植物野葛或甘葛藤根中提取的一種異黃酮類化合物，被廣泛應(yīng)用于冠狀動脈疾病，其在下肢缺血性疾病中的應(yīng)用未曾見報(bào)道，且在以往的報(bào)道與研究中，葛根素的給藥途徑均局限為靜脈注射、腹腔注射或灌胃。本研究中，我們將葛根素包載于高分子聚合物PLGA中，制得PLGA-葛根素支架，達(dá)到了緩釋的效果，將其置入下

6、肢缺血模型大鼠缺血下肢中，觀察其促進(jìn)血管新生的作用。此支架在大鼠缺血下肢血管新生及血流灌注方面均取得了良好的效果。我們對機(jī)制也進(jìn)行了初步的探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在支架置入組，骨骼肌中與血管新生密切相關(guān)的一氧化氮合酶(eNOs)、血管衍生生長因子-β(PDGF-β)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA均有著高表達(dá)量。支架置入組大鼠并未出現(xiàn)溶血反應(yīng)，血常規(guī)及內(nèi)臟病理學(xué)檢測均正常，表明支架具有良好的生物相容性。之后我們將葛根素應(yīng)用于創(chuàng)傷修復(fù)中，也

7、取得了較好的效果。
　　 綜上所述，載rhbFGF的Mg-PLGA藥物涂層支架及載葛根素的PLGA藥物涂層支架可促進(jìn)下肢缺血大鼠缺血骨骼肌血管新生，為危重癥下肢缺血性疾病的治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 第二部分：
　　 制備新型腦主動靶向抗體OX26耦聯(lián)的超支化聚甘油接枝的聚乳酸-聚乙醇酸(hyperbranchedpolyglycerol-conjugatedpoly(lactic-co-glycolicacid)

8、,HPG-PLGA)納米粒子。合成、表征聚合物HPG-PLGA，并通過復(fù)合乳液法制備納米粒子，透射電鏡顯示納米粒子平均粒徑為170±20nm，X射線光電子能譜進(jìn)行表面元素分析。內(nèi)嗎啡肽，作為模擬藥物，被包載于納米粒子中。體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)表面內(nèi)嗎啡肽可以持續(xù)釋放長達(dá)72h。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞對納米離子的攝取作用是時(shí)間依賴性和濃度依賴性，攝取抑制實(shí)驗(yàn)表明這是一個(gè)caveolae相關(guān)的吸附介導(dǎo)的內(nèi)吞過程。動物實(shí)驗(yàn)在慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎大