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文檔簡介
1、目的：最近研究顯示癌癥來源于癌干細胞(CSC)，即腫瘤源發(fā)細胞，其有許多特性與干細胞相似。已分離鑒定出人的癌癥細胞中存在CSC，而動物源性CSC的分離鑒定仍未見報道。根據(jù)人源性腫瘤細胞與動物源性腫瘤細胞有諸多相似的生物學特性，本研究試圖從鼠黑色素瘤 B16F10 細胞中分離與鑒定 CSC，為今后對 CSC 抗藥性、靶向治療及信號傳導通路等研究奠定基礎。 方法：從小鼠黑色素瘤分離瘤細胞，用不同免疫磁珠標記的單克隆抗體篩選出具有特征
2、性標記的瘤細胞，采用流式細胞儀，對分離細胞進行鑒定和純度評價；體外觀察不同CD表型瘤細胞的增殖活性；再經(jīng)軟瓊脂培養(yǎng)基或普通培養(yǎng)基形成克隆能力篩選及通過皮下注射特征性 CD 標記的瘤細胞到 C57BL/6 小鼠體內(nèi)，比較其致瘤性，最后綜合分析與鑒定B16F10 細胞中 CSC。 結(jié)果：1。用不同免疫磁珠標記的單克隆抗體從小鼠B16F10細胞中成功分離出CDl33<'+>、CDl33<'->、CD44<'+>、CD44<'->、CD
3、44<'+>CDl33<'+>、CD44<'+>CDl33<'->等特征性CD標記的瘤細胞，經(jīng)流式細胞儀分析顯示，用不同免疫磁珠標記的單克隆抗體分離的瘤細胞純度較高、兩者檢測結(jié)果基本一致。2．經(jīng)軟瓊脂培養(yǎng)基或普通培養(yǎng)基形成克隆能力篩選結(jié)果顯示：CDl33<'+>B16F10細胞的克隆形成率高于CDl33<'->B16F10細胞，CD44<'+>B16F10細胞克隆形成率高于CD44<'->B16F10細胞。CD44<'+>CDl33<'
4、+>B16F10細胞克隆形成率高于CD44<'+>CDl33<'->B16F10細胞。3．CDl33<'+>B16F10細胞體外增殖活性要高于CDl33<'->。4．CDl33<'+>、CD44M<'+>、CD44<'+>CDl33<'+>和CD44<'+>CDl33<'+>CD24<'+>B16F10細胞在C57BL/6小鼠體內(nèi)致瘤性分別強于CDl33<'->、CD44<'->、CD44<'+>CDl33<'->和CD44<'+>CD
5、l33<'+>CD24<'->B16F10細胞。． 結(jié)論：CDl33+B16F10細胞體外增殖活性較高，CDl33<'+>、CD44<'+>、CD44<'+>CDl33<'+>B16F10細胞在軟瓊脂培養(yǎng)基或普通培養(yǎng)基上形成克隆能力較強、CD44<'+>CDl33<'+>CD24<'+>B16F10 細胞在C57BL/6小鼠體內(nèi)致瘤性較強。從鼠黑色素瘤B16F10細胞分離和鑒定的初步研究結(jié)果經(jīng)綜合分析后認為，具有CD44
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