從鼠黑色素瘤分離和鑒定CSC的初步研究.pdf

1、目的：最近研究顯示癌癥來(lái)源于癌干細(xì)胞(CSC)，即腫瘤源發(fā)細(xì)胞，其有許多特性與干細(xì)胞相似。已分離鑒定出人的癌癥細(xì)胞中存在CSC，而動(dòng)物源性CSC的分離鑒定仍未見報(bào)道。根據(jù)人源性腫瘤細(xì)胞與動(dòng)物源性腫瘤細(xì)胞有諸多相似的生物學(xué)特性，本研究試圖從鼠黑色素瘤 B16F10 細(xì)胞中分離與鑒定 CSC，為今后對(duì) CSC 抗藥性、靶向治療及信號(hào)傳導(dǎo)通路等研究奠定基礎(chǔ)。 方法：從小鼠黑色素瘤分離瘤細(xì)胞，用不同免疫磁珠標(biāo)記的單克隆抗體篩選出具有特征

2、性標(biāo)記的瘤細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀，對(duì)分離細(xì)胞進(jìn)行鑒定和純度評(píng)價(jià)；體外觀察不同CD表型瘤細(xì)胞的增殖活性；再經(jīng)軟瓊脂培養(yǎng)基或普通培養(yǎng)基形成克隆能力篩選及通過(guò)皮下注射特征性 CD 標(biāo)記的瘤細(xì)胞到 C57BL/6 小鼠體內(nèi)，比較其致瘤性，最后綜合分析與鑒定B16F10 細(xì)胞中 CSC。 結(jié)果：1。用不同免疫磁珠標(biāo)記的單克隆抗體從小鼠B16F10細(xì)胞中成功分離出CDl33<'+>、CDl33<'->、CD44<'+>、CD44<'->、CD

3、44<'+>CDl33<'+>、CD44<'+>CDl33<'->等特征性CD標(biāo)記的瘤細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀分析顯示，用不同免疫磁珠標(biāo)記的單克隆抗體分離的瘤細(xì)胞純度較高、兩者檢測(cè)結(jié)果基本一致。2．經(jīng)軟瓊脂培養(yǎng)基或普通培養(yǎng)基形成克隆能力篩選結(jié)果顯示：CDl33<'+>B16F10細(xì)胞的克隆形成率高于CDl33<'->B16F10細(xì)胞，CD44<'+>B16F10細(xì)胞克隆形成率高于CD44<'->B16F10細(xì)胞。CD44<'+>CDl33<'

4、+>B16F10細(xì)胞克隆形成率高于CD44<'+>CDl33<'->B16F10細(xì)胞。3．CDl33<'+>B16F10細(xì)胞體外增殖活性要高于CDl33<'->。4．CDl33<'+>、CD44M<'+>、CD44<'+>CDl33<'+>和CD44<'+>CDl33<'+>CD24<'+>B16F10細(xì)胞在C57BL/6小鼠體內(nèi)致瘤性分別強(qiáng)于CDl33<'->、CD44<'->、CD44<'+>CDl33<'->和CD44<'+>CD

5、l33<'+>CD24<'->B16F10細(xì)胞。． 結(jié)論：CDl33+B16F10細(xì)胞體外增殖活性較高，CDl33<'+>、CD44<'+>、CD44<'+>CDl33<'+>B16F10細(xì)胞在軟瓊脂培養(yǎng)基或普通培養(yǎng)基上形成克隆能力較強(qiáng)、CD44<'+>CDl33<'+>CD24<'+>B16F10 細(xì)胞在C57BL/6小鼠體內(nèi)致瘤性較強(qiáng)。從鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞分離和鑒定的初步研究結(jié)果經(jīng)綜合分析后認(rèn)為，具有CD44