哈密瓜果斑病菌群體感應(yīng)系統(tǒng)相關(guān)基因的克隆及其在檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、哈密瓜細(xì)菌性果斑病是一種嚴(yán)重影響哈密瓜質(zhì)量和產(chǎn)量的病害,由燕麥?zhǔn)乘峋鞴蟻喎N(Acidovorax avenae subsp.citrulli)引起.目前,關(guān)于該病原菌的分子遺傳學(xué)研究較少.細(xì)菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)是近年來國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一,許多植物病原細(xì)菌毒性因子的產(chǎn)生都依賴于群體感應(yīng)(quorum-sensing,QS),本文對(duì)燕麥?zhǔn)乘峋鞴蟻喎N群體感應(yīng)系統(tǒng)進(jìn)行了初步研究. 本文(1)以Agrobacterium tumefaciens

2、 NTL4(pZLR4)為信號(hào)檢測(cè)菌,對(duì)燕麥?zhǔn)乘峋鞴蟻喎N19個(gè)菌株進(jìn)行了群體感應(yīng)信號(hào)分子的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)18個(gè)菌株能產(chǎn)生信號(hào)分子.(2)構(gòu)建了燕麥?zhǔn)乘峋鞴蟻喎N的高效基因組文庫,利用QS系統(tǒng)中信號(hào)合成基因在Escherichia.coli DH5α的異源表達(dá),以A tumefaciens NTLA(pZLR4)為信號(hào)檢測(cè)菌,從菌株P(guān)slb-94基因組文庫中克隆到兩個(gè)陽性轉(zhuǎn)化子,p5ACC14和p5ACC40.(3)將克隆到的轉(zhuǎn)化子p5AC

3、C14通過電擊導(dǎo)入Pseudomonasfluorescens 2P24△I,成功恢復(fù)了信號(hào)產(chǎn)生能力.(4)將p5ACC14進(jìn)一步亞克隆,得到長(zhǎng)5.5Kb左右的片段,通過核苷酸序列比對(duì)和保守結(jié)構(gòu)域分析,發(fā)現(xiàn)其中有1個(gè)開放閱讀框與NCBI中登陸的A avenae subsp.citrulli AAC00-1NC008752群體感應(yīng)基因的核苷酸序列同源性為100﹪,將獲得的基因命名為aad.(5)構(gòu)建了aacl基因的原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化E.