大豆斑疹病菌致病相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、大豆斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv.glycines，Xag)是大豆上的重要病原細菌，引起大豆斑疹病。磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase，Pgk)可逆地催化1，3-二磷酸甘油酸生成3-磷酸甘油醛。pgk突變顯著地削弱病原菌獲取蔗糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖的能力，并完全阻斷丙酮酸的獲取;pgk突變減弱病原菌在大豆上的毒性與生長能力，導(dǎo)致病原菌ATP產(chǎn)生及EPS合成明顯減少、并

2、顯著降低生物膜形成及細胞游動性。功能互補能部分恢復(fù)上述表型至野生型水平;而全局性調(diào)控子Clp(cAMP-like protein)對上述表型并無恢復(fù)能力。此外，qRT-PCR結(jié)果顯示:pgk受上述六種糖的顯著誘導(dǎo)表達，相對于無糖條件下，誘導(dǎo)表達量達10倍以上。clp突變顯著地減弱病原菌的EPS合成、生物膜形成、細胞游動性以及在寄主大豆上的毒性與生長能力;過表達clp同樣明顯地降低病原菌的EPS合成及生物膜形成，但能超量互補病原菌的細胞游

3、動性。酶活測定實驗揭示，Clp對Xag纖維素酶、內(nèi)切甘露聚糖酶及淀粉酶活性具有正調(diào)控作用，而對蛋白酶活性具有正負調(diào)控作用。qRT-PCR結(jié)果表明:clp突變顯著地抑制gum基因簇的表達，而clp過表達明顯抑制gumB、gumC的表達;Rpf及HrpX/HrpG級聯(lián)均正調(diào)控clp的轉(zhuǎn)錄表達。此外，本研究還新發(fā)現(xiàn)Clp對Xag獲取碳源能力具有正負調(diào)控作用，clp缺失具有延遲并削弱病原菌激發(fā)HR的能力。以上證據(jù)表明，Pgk和Clp是Xag的毒