鋅離子對重組大腸桿菌P84AMC1061表達(dá)鹵醇脫鹵酶的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本文主要針對鋅離子在基因工程大腸桿菌表達(dá)鹵醇脫鹵酶過程中的重要影響進(jìn)行了系統(tǒng)研究。
　　首先,通過搖瓶實驗顯著篩選出影響鹵醇脫鹵酶表達(dá)的金屬離子——Zn2+,并確定其最優(yōu)濃度為0.7mg/L;
　　其次,在50L罐中進(jìn)行了上述搖瓶實驗結(jié)果的放大研究,探索了分批發(fā)酵過程中鋅離子的最佳添加時機和濃度,對動態(tài)變化數(shù)據(jù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn):鋅離子不僅可顯著提高大腸桿菌的生理活性、比生長速率和營養(yǎng)物質(zhì)消耗速率,還能有效提高鹵醇脫鹵酶的表達(dá)以及

2、酶的純度,在此基礎(chǔ)上篩選出最優(yōu)鋅離子添加策略( pdr4),發(fā)酵開始時加入0.35mg/LZn2+,對數(shù)生長期快結(jié)束時(約8h)加入0.35mg/L,此策略下相比對照組,最大比酶活和最大酶活分別提高5.42％和9.8%;
　　第三,對 L-阿拉伯糖和 Zn2+的協(xié)同調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了關(guān)聯(lián)研究,研究發(fā)現(xiàn):添加鋅離子的情況下,L-Ar添加含量為1‰時最佳,鹵醇脫鹵酶可以較好地積累和表達(dá),而過量添加的 L-Ar主要作為碳源參與菌體體內(nèi)的磷酸