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文檔簡介
1、脫鹵酶又叫去鹵化酶,是可以催化碳鹵鍵水解斷裂產(chǎn)生相應的醇和離子的酶?,F(xiàn)在已經(jīng)知道的脫鹵酶的種類主要有5種,分別是烷基脫鹵酶,鹵代酸脫鹵酶,4-氯苯甲酰-輔酶A脫鹵酶,鹵代醇脫鹵酶,3-鹵丙烯酸脫鹵酶。脫鹵酶的作用是能夠降解環(huán)境中的很多鹵化污染物,并且還能夠介導很多有機鹵化物脫鹵反應,使其成為重要的藥物中間體。因此,脫鹵酶長期以來一直是人們研究的熱點之一。
本文以特定的底物對實驗室現(xiàn)有的菌株進行篩選,然后將篩選到的菌株進行鑒定,
2、對產(chǎn)脫鹵酶的發(fā)酵條件進行優(yōu)化,脫鹵酶酶活的測定,進行放大實驗。
首先是以1,3-二氯丙醇為底物,從實驗室保藏的菌株中進行篩選,篩選到一株對底物轉(zhuǎn)化率比較高的菌株。然后對這株轉(zhuǎn)化率比較高的菌株進行鑒定,鑒定結果為放射形土壤桿菌。然后對轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化,分別確定了最佳碳源、氮源、混合磷酸鹽。對發(fā)酵條件的優(yōu)化分別從裝液量、種子培養(yǎng)時間、接種量、發(fā)酵溫度、初始 pH值,搖床轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)化時間、底物添加量等幾個方面進行了優(yōu)化。
3、最優(yōu)轉(zhuǎn)化條件如下:最佳碳源為蔗糖,最佳濃度為45 g/L;最佳氮源為蛋白胨,最佳濃度為10 g/L;混合磷酸鹽(磷酸氫二銨和磷酸氫二鉀)為2.6g/L,裝液量為50 mL/250 mL,接種種齡為16 h,接種量為6%,最佳的底物添加量為40 mg/mL,最適培養(yǎng)溫度為30℃,搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min,培養(yǎng)基初始pH為7.0,轉(zhuǎn)化時間為48 h;通過底物溶解方式的優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)使用乙醇溶解的時候轉(zhuǎn)化率最高,所以確定溶解方式為用乙醇溶解。
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