鹵醇脫鹵酶的改造與發(fā)掘.pdf

1、鹵醇脫鹵酶不僅可以催化污染環(huán)境的有機(jī)鹵化物的分解，從而降低其污染性，而且可以催化合成許多藥物的中間體，在手性藥物合成方面有廣闊的應(yīng)用前景，不過(guò)目前數(shù)據(jù)庫(kù)中只有6種此類(lèi)酶，為更好的利用這種酶，一方面可以運(yùn)用突變等手段在催化活性、穩(wěn)定性等方面改進(jìn)現(xiàn)有酶的性質(zhì)，另一方面可以通過(guò)宏基因組技術(shù)發(fā)掘新的更理想的鹵醇脫鹵酶。
　　本文運(yùn)用定點(diǎn)突變和飽和突變技術(shù)對(duì)酶進(jìn)行改造，將活性中心附近的12位大殘基苯丙氨酸突變?yōu)檩^小殘基的丙氨酸后，發(fā)現(xiàn)比酶活

2、和對(duì)鹵素離子的解離常數(shù)均提高了三倍，說(shuō)明小的側(cè)鏈有利于鹵素離子的釋放，進(jìn)而有利于酶活性的提高。
　　同時(shí)構(gòu)建了兩個(gè)突變體文庫(kù)F186X/Y187X和W249X/F86X/W139X，用以1,3-DCP(1,3-二氯丙醇)為底物的比色法進(jìn)行篩選，然后測(cè)定其理化性質(zhì)，得到活性提高40倍的突變體W249P/F86A/W139F，說(shuō)明249，86，139三個(gè)位點(diǎn)間有正向疊加作用，造成酶空間構(gòu)象的變化，從而更有利于酶催化活性的發(fā)揮。