丙戊酸誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞自噬的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、研究背景
　　 在男性發(fā)生的惡性腫瘤中，前列腺癌發(fā)病名列前茅，而且在癌癥引起的死亡中占第二位。越來越多的研究證明了組蛋白乙酰化酶抑制劑(HDACIs)在治療前列腺癌的過程中發(fā)揮了重要作用，其中丙戊酸(ValproicAcid,VPA)在前列腺癌的研究中顯示了良好的療效。已經(jīng)有很多臨床試驗(yàn)顯示VPA具有抗腫瘤作用，最近的研究證明在多種不同的腫瘤細(xì)胞系中，VPA都顯示出了明顯的腫瘤抑制作用。我們先前的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明了VPA作為選擇性一

2、類和二類的HDACI，在體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)中都具有慢性長期阻滯腫瘤細(xì)胞增殖的療效。本次研究中，我們采用幾種不同的前列腺癌細(xì)胞系，研究了VPA誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬與抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，并且這一作用可能與Akt/mTOR信號通路的抑制，以及SPARCL蛋白家族的分泌有關(guān)。該項(xiàng)研究揭示了VPA抗前列腺癌作用可能的分子機(jī)制，也為VPA的臨床應(yīng)用提供了可能的理論研究基礎(chǔ)。
　　 研究目的
　　 (1)對VPA誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞系發(fā)生自噬性程

3、序性死亡進(jìn)行體外觀測，并探討其可能的分子信號通路。(2)尋找可能的靶基因，并研究VPA對靶基因SPARCL1的調(diào)節(jié)機(jī)制，以及對前列腺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用。
　　 實(shí)驗(yàn)方法
　　 常規(guī)培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞系PC3，DU145以及LNCaP。經(jīng)過不同濃度VPA處理(0，1.2，2.5and5.0mmol/L)，計(jì)算不同濃度對細(xì)胞的抑制率，電子顯微鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，免疫熒光檢測自噬相關(guān)蛋白，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，WesternBl

4、ot技術(shù)檢測Akt/mTOR信號通路相關(guān)蛋白以及SPARCL1蛋白，構(gòu)建SPARCL1過表達(dá)PC3細(xì)胞系，通過tranwell細(xì)胞遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)，觀察SPARCL1蛋白和VPA對前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 VPA可以抑制細(xì)胞增殖，阻滯細(xì)胞周期，并且可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生自噬溶酶體。不同濃度VPA處理過前列腺癌細(xì)胞之后，可以觀察到自噬相關(guān)蛋白LC3-ⅡandBeclin-1的增加。Akt/mTOR信號通路的活

5、性在VPA組被明顯抑制，并且呈現(xiàn)濃度依賴性，磷酸化Akt及磷酸化mTOR隨著VPA濃度的增高逐漸減少。我們還發(fā)現(xiàn)VPA處理組SPARCL1蛋白分泌增加，當(dāng)通過過表達(dá)SPARCL1的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞之后，過表達(dá)SPARCL1蛋白的PC3細(xì)胞在腫瘤遷移以及侵襲能力上都減弱。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
　　 VPA可以誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生自噬并且抑制癌細(xì)胞的增殖，遷移以及侵襲能力。這一現(xiàn)象及過程可能與VPA對Akt/mTOR信號通路以