SLC26A4基因及其致聾突變?cè)贑Os-7細(xì)胞中的表達(dá)與功能分析.pdf

1、中圖分類(lèi)號(hào)UDC博士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q53呈密級(jí)公玨SLC26A4基因及其致聾突變?cè)贑OS7細(xì)胞中的表達(dá)與功能分析Functionalanalysisofpendrin(SLC26A4)anditspathogenicmutationsinCOS7cells作者姓名：學(xué)科專(zhuān)業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：論文答辯日期張海林臨床醫(yī)學(xué)耳鼻咽喉科學(xué)湘雅醫(yī)院馮永教授答辯委員會(huì)主席中南大學(xué)二零一三年五月一苓一二年血月SLC26A4基因及

2、其致聾突變?cè)贑OS一7細(xì)胞中的表達(dá)與功能分析摘要SLC26A4突變所致疾病為常染色體隱|生遺傳，目前已發(fā)現(xiàn)200多種不同的突變類(lèi)型，可導(dǎo)致Pendred綜合征和DFNB4(OMIM600791)非綜合征型遺傳性耳聾。Pendred綜合征臨床表現(xiàn)為甲狀腺腫大(甲狀腺功能正?；蜉p微降低)和耳聾。SLC26A4突變導(dǎo)致的耳聾常常伴隨有內(nèi)耳畸形，其中最常見(jiàn)的畸形是前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大(enlargedvestibularaqueductEVA)和Mo

3、ndim畸形。Pendrin在內(nèi)耳主要參與CI。、HC03‘的轉(zhuǎn)運(yùn)，與維持耳蝸內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有關(guān)。另外，pendrin蛋白不直接調(diào)節(jié)鉀離子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，但研究發(fā)現(xiàn)Pendrin對(duì)維持耳蝸內(nèi)電位(鉀離子平衡電位)產(chǎn)生聽(tīng)覺(jué)起到至關(guān)重要的作用。本研究以本實(shí)驗(yàn)室首先發(fā)現(xiàn)的SLC26A4致耳聾突變$448X，以及構(gòu)建的$448X突變體和野生型SLC26A4與GFP融合基因表達(dá)質(zhì)粒為基礎(chǔ)，分別體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞，Westemblot檢測(cè)驗(yàn)證蛋白表達(dá)，然后直接觀(guān)

4、察融合蛋白綠色熒光，同時(shí)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)，高爾基體(Golgi)，微管組織免疫熒光染色，利用免疫熒光的方法觀(guān)察突變體pendrin蛋白的亞細(xì)胞定位改變。另一方面，利用膜片鉗技術(shù)記錄分別表達(dá)野生型和突變體的細(xì)胞的全細(xì)胞電流的差異，明確SLC26A4基因突變對(duì)細(xì)胞氯離子和鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響。目的：觀(guān)察SLC26A4基因及其一個(gè)致聾突變$448X在體外細(xì)胞中的表達(dá)與功能改變，以探討其致病的可能機(jī)理。方法：將已構(gòu)建完成的突變$448X和野生型