人腦惡性膠質瘤微血管內皮細胞分離、培養(yǎng)和VEGF誘導其三維成型的研究.pdf

1、該研究基于對腫瘤源性內皮細胞異質性和惡性膠質瘤微血管的豐富性,分離、純化了人腦惡性膠質瘤源性微血管內皮細胞(GDMEC),并進行了傳代培養(yǎng);利用三維細胞培養(yǎng)模型初步觀察了血管內皮生長因子(VEGF)對GDMEC在三維膠原基質中小管樣結構(tubule-like structure)形成的作用.主要結果與結論如下:1.采用胰酶、膠原酶聯合消化法,分離獲得人腦惡性膠質瘤微血管片段;利用MACS MicroBeads免疫磁珠內皮細胞分選系統,

2、獲得高純度、可連續(xù)傳代的GDMEC.具體方法是:膠質瘤組織經胰酶、膠原酶消化后的微血管片段接種在明膠包被的細胞培養(yǎng)瓶中,經8~10天培養(yǎng)以富集內皮細胞.2.應用光鏡、透射電鏡和免疫細胞化學等技術對所獲內皮細胞進行了鑒定.純化GDMEC呈單層片狀生長、互不重疊,可見到有孔內皮細胞.透射電鏡除見到內皮細胞結構特征包括Weibel-Palade小體、豐富的內質網、線粒體等細胞器外,還見到較多微管和微絲,后者以周邊部明顯.FⅧ-Rag免疫細胞化

3、學染色顯示細胞漿及核周呈陽性反應.形態(tài)學及免疫化學結果表明所獲GDMEC具內皮細胞屬性.3.建立并利用GDMEC三維細胞培養(yǎng)模型,比較觀測了所獲GDMEC和內皮樣細胞ECV304在三維膠原基質中小管樣結構形成情況.結果顯示,GDMEC細胞伸展、變形呈扁平狀;細胞之間相互連接,形成小管樣結構;不同濃度的VEGF刺激后可加速小管樣結構的形成、增加形成數量,并促進小管樣結構進一步形成毛細血管樣網絡,而ECV304細胞缺乏這一特性,提示該研究所

4、獲得GDMEC更適合體外研究腫瘤血管生成之用.上述實驗結果表明,雙酶消化法和免疫磁珠細胞分選技術相結合能有效地獲得高純度GDMEC,且具可傳代性、對生長因子VEGF具高度敏感的特性.該研究所獲得的內皮細胞為GDMEC進一步克隆建株奠定了基礎,所摸索出的GDMEC分離和純化方法為建立其它實體瘤內皮細胞培養(yǎng)體系也積累了經驗.該實驗不僅有助于認識腫瘤環(huán)境誘導下的內皮細胞異質性,而且為深入研究腫瘤血管生成和抗血管生成治療提供了更為適用的實驗材料