雷公藤氯內(nèi)酯醇(T-,4-)通過激活Wnt-β-catenin信號(hào)通路減輕寡聚態(tài)Aβ-,1-42-誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡.pdf

1、目的：觀察寡聚態(tài)Aβ1-42對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠皮層神經(jīng)元凋亡的誘導(dǎo)作用及可能機(jī)制，探討雷公藤氯內(nèi)酯醇(tripchlorolide，T4)保護(hù)大鼠皮層神經(jīng)元免于發(fā)生凋亡的作用及可能機(jī)制。
　　 方法：選用孕16-18d的清潔級(jí)SD(Sprague-Dawley)大鼠，分離純化皮層神經(jīng)元，應(yīng)用5μmol/l寡聚態(tài)Aβ1-42以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路激動(dòng)劑Wnt3a和抑制劑Dkk1處理神經(jīng)元，分別通過MTT法、TUNEL

2、染色和蛋白免疫印跡術(shù)觀察神經(jīng)元存活率、細(xì)胞凋亡情況以及β-catenin和GSK3β及其磷酸化產(chǎn)物的表達(dá)水平，了解Wnt/β-catenin信號(hào)通路在寡聚態(tài)Aβ1-42誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡過程中的作用，并進(jìn)一步探討T4保護(hù)神經(jīng)元免于凋亡的可能分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：⑴5μmol/l寡聚態(tài)Aβ1-42與原代培養(yǎng)的胎鼠皮層神經(jīng)元共同孵育24h后，MTT檢測(cè)神經(jīng)元存活率較正常對(duì)照組明顯下降，TUNEL染色神經(jīng)元胞體縮小，細(xì)胞突起變短、消失

3、，胞核深染。⑵寡聚態(tài)Aβ1-42作用于胎鼠皮層神經(jīng)元24h后，GSK3β、磷酸化GSK3β、磷酸化β-catenin水平升高，非磷酸化β-catenin水平下降，這與Wnt/β-catenin通路抑制劑Dkk1的作用類似。⑶用不同濃度T4對(duì)胎鼠的皮層神經(jīng)元進(jìn)行預(yù)處理后再加入寡聚態(tài)Aβ1-42共同孵育，發(fā)現(xiàn)T4對(duì)寡聚態(tài)Aβ1-42誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷有明顯的保護(hù)作用，表現(xiàn)為T4可顯著提高寡聚態(tài)Aβ1-42作用后的皮層神經(jīng)元生存率，減少神經(jīng)元凋

4、亡；此外T4可選擇性降低細(xì)胞內(nèi)β-catenin的磷酸化程度，穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)β-catenin水平，同時(shí)減少GSK3β及其磷酸化產(chǎn)物水平，這與Wnt/β-catenin通路激動(dòng)劑Wnt3a的作用類似。
　　 結(jié)論：①寡聚態(tài)Aβ1-42可誘導(dǎo)胎鼠皮層神經(jīng)元凋亡；Wnt/β-catenin信號(hào)通路是Aβ1-42誘導(dǎo)胎鼠的皮層神經(jīng)元凋亡的可能途徑。②一定劑量T4預(yù)處理可減輕寡聚態(tài)Aβ1-42誘導(dǎo)胎鼠的皮層神經(jīng)元凋亡。T4的神經(jīng)元保護(hù)作用可