8％乳化異氟醚后處理對(duì)脂多糖致急性肺損傷大鼠的肺保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分 8％乳化異氟醚后處理對(duì)脂多糖致急性肺損傷大鼠的影響及其劑量效應(yīng)關(guān)系
　　目的：觀(guān)察8％乳化異氟醚后處理對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)致急性肺損傷(acute lung injury,ALI)大鼠的影響及其劑量效應(yīng)關(guān)系研究
　　方法：48只、健康、雄性SD大鼠,體重200~250g,隨機(jī)分成6組(n=8):對(duì)照組(C)、脂多糖組(L)、脂肪乳組(LE)

2、及乳化異氟醚后處理組(分別為低、中、高劑量,即L-EI、M-EI、H-EI)。除C組外,均經(jīng)尾靜脈注射LPS10mg/kg來(lái)復(fù)制ALI模型,而給C組經(jīng)尾靜脈注射等量生理鹽水。2h后,分別給L-EI組、M-EI組和H-EI組經(jīng)腹腔注射3.5、7.0、10.5ml/kg的8％乳化異氟醚,LE組經(jīng)腹腔注射10.5ml/kg的30％脂肪乳,C組與L組給10.5ml/kg生理鹽水(ip)。各組于建模前1h及建模后2、8h進(jìn)行血?dú)夥治觥＝：?h心

3、臟采血處死大鼠,用4℃生理鹽水沖洗左肺并收集支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),用ELISA法測(cè)定血清和BALF中炎性因子:TNF-α、IL-6變化;光鏡下觀(guān)察HE染色后右肺下葉的病理學(xué)改變并統(tǒng)計(jì)評(píng)分;統(tǒng)計(jì)右肺中葉濕/干重(W/D)比值。
　　結(jié)果：肺組織光鏡檢查:C組大鼠肺泡的基本結(jié)構(gòu)相對(duì)完整,肺泡壁、肺泡間隔無(wú)水腫,無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等特殊表現(xiàn);L組肺泡結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,大量的

4、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)伴有明顯出血,肺泡、肺間質(zhì)水腫嚴(yán)重,部分肺泡不張等;LE組肺泡結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,伴較多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、出血,肺泡、肺間質(zhì)水腫明顯,部分肺泡不張等;與LE組比較,L-EI組肺組織損傷程度改善不明顯;M-EI組肺組織結(jié)構(gòu)中度破壞,較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)伴出血,肺泡、肺間質(zhì)中度水腫,部分肺泡不張等;H-EI組肺組織結(jié)構(gòu)相對(duì)完整,少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)伴輕度出血,肺泡間隔增寬相對(duì)不明顯。L組、LE組和L-EI組三組肺組織結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)重度炎癥反應(yīng),而M-

5、EI組和H-EI組分別呈現(xiàn)中、輕度炎癥反應(yīng)。與C組相比,各組BALF與血清中IL-6、TNF-α濃度顯著升高,右肺中葉W/D比和右肺下葉病理形態(tài)學(xué)積分增大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);但是與L組相比,LE組、L-EI組無(wú)明顯差異(P>0.05),而M-EI組和H-EI組的顯著下降(P<0.05),并且H-EI組肺損傷程度輕于M-EI組(P<0.05),M-EI組輕于L-EI組(P<0.05)。各組間建模前氧合指數(shù)(PaO2/FiO

6、2)比較無(wú)明顯差異(P>0.05);除C組外,與同組基礎(chǔ)值相比,建模后各組的PaO2/FiO2明顯下降(P<0.05),且建模后2h各組PaO2/FiO2<300mmHg,表明造模成功;同時(shí)間段與C組比較,各組建模后PaO2/FiO2大幅度下降(P<0.05);而建模后8h,與L組比較,M-EI組、H-EI組的明顯上升(P<0.05), LE組、L-EI組的則無(wú)明顯改變(P>0.05);L-EI組、M-EI組及H-EI組PaO2/FiO

7、2呈上升趨勢(shì)(P<0.05);與建模后2h比較,L組建模后8h的PaO2/FiO2顯著降低,而H-EI組明顯升高(P<0.05);L組、LE組、L-EI組三組,組間比較無(wú)明顯的差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、大鼠ALI模型可以在經(jīng)尾靜脈注射LPS10mg/kg后2h被成功復(fù)制。
　　2、腹腔注射7.0、10.5ml/kg的8％乳化異氟醚對(duì)ALI大鼠進(jìn)行后處理,可一定程度的改善其肺組織損傷,并隨著劑量的增加保

8、護(hù)作用增強(qiáng)。
　　第二部分 8％乳化異氟醚后處理對(duì)脂多糖致急性肺損傷大鼠肺組織Toll樣受體4表達(dá)的影響
　　目的：觀(guān)察8％乳化異氟醚后處理對(duì)LPS致ALI大鼠肺組織Toll樣受體4(Toll like receptor4,TLR4)表達(dá)的影響,探討其可能的肺保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：32只、健康、雄性SD大鼠,體重200~250g,隨機(jī)分為4組(n=8):對(duì)照組(C)、脂多糖組(L)、脂肪乳對(duì)照組(LE)及乳化異氟醚

9、后處理組(EI)。除C組外,均經(jīng)尾靜脈注射LPS10mg/kg來(lái)復(fù)制ALI模型,而給C組經(jīng)尾靜脈注射等量生理鹽水。2h后,EI組腹腔注射8％乳化異氟醚10.5ml/kg,LE組腹腔注射30％脂肪乳10.5ml/kg, C組、L組給10.5ml/kg生理鹽水(ip)。于建模前1h及建模后2、8h進(jìn)行血?dú)夥治?并于建模后8h心臟采血處死大鼠,并收集BALF及血液,取右肺下葉組織,石蠟包埋切片,HE染色,光鏡下對(duì)肺組織病理學(xué)改變?cè)u(píng)分;統(tǒng)計(jì)大鼠

10、右肺中葉濕/干重(W/D)比。取右肺上葉組織,用熒光定量PCR測(cè)定肺組織TLR4、NF-κBmRNA表達(dá)水平;Western Blot半定量測(cè)定肺組織TLR4蛋白表達(dá)水平。用ELISA測(cè)定BALF和血清中TNF-α、IL-6表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與C組比較,各組大鼠肺組織TLR4 mRNA和蛋白以及NF-κBmRNA表達(dá)上調(diào),BALF和血清中TNF-α、IL-6水平上升,肺病理形態(tài)學(xué)積分、肺W/D比升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.

11、05)。與L組或LE組比較,EI組上述指標(biāo)明顯升高(P<0.05)。但L組與LE組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組間建模前PaO2/FiO2比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);除C組外,與同組基礎(chǔ)值相比,各組建模后2、8h氧合指數(shù)(PaO2/FiO2)顯著降低(P<0.05)且模后2h各組PaO2/FiO2<300mmHg,表明建模成功;同時(shí)間段與C組比較,建模后各組PaO2/FiO2均明顯下降(P<0.05);建模后8h