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文檔簡介
1、目的:觀察大鼠呼吸黏膜外胚層間充質(zhì)來源的雪旺細(xì)胞對脊髓來源神經(jīng)干細(xì)胞生長分化的作用及其在損傷脊髓中的遷移情況、組織相容性,評價用纖維蛋白膠支架搭載該細(xì)胞用于移植修復(fù)急性胸腰段脊髓損傷的能力。
方法:
(1)從SD大鼠固有鼻腔中活體剝離鼻黏膜制成黏膜懸液,體外單一化培養(yǎng)并擴增其中的外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs),用雪旺細(xì)胞(schwanncell,SC)誘導(dǎo)培養(yǎng)基
2、將其誘導(dǎo)為類SC細(xì)胞并用dil熒光探針進行細(xì)胞膜標(biāo)記。
(2)分離提取胚胎鼠的脊髓神經(jīng)干細(xì)胞,與第一步誘導(dǎo)而來的SCs共培養(yǎng),觀察大鼠EMSCs源SCs對脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)化生長的影響
(3)建立針刺脊髓損傷模型并移植標(biāo)記過的雪旺細(xì)胞,針刺脊髓損傷并移植細(xì)胞后一周,觀察EMSCs源SCs在脊髓組織內(nèi)的生存、凋亡、擴增和遷移情況,評價其與損傷脊髓組織的相容性及對損傷環(huán)境的適應(yīng)性。
(4)制作T9/10胸腰段脊
3、髓橫斷模型,將健康清潔級SD大鼠60只完全隨機分為3組:單純脊髓損傷(SCI)組、單純纖維蛋白膠移植(Fibrin)組和細(xì)胞-支架復(fù)合物移植(F-C)組,術(shù)后每周進行BBB運動行為學(xué)評分。術(shù)后12周取出損傷段上下脊髓組織,采用HE染色法、免疫組織化學(xué)染色法觀察脊髓橫斷部位神經(jīng)纖維重建和髓鞘再生情況,用和Western Blot免疫印跡檢測法檢測神經(jīng)絲蛋白(NF-200)、生長相關(guān)蛋白-43(GAP-43)和髓鞘堿性蛋白(MBP)含量的相
4、對變化。
結(jié)果:
(1) EMSCs來源的SCs體外生長、擴增狀態(tài)好,免疫熒光結(jié)果顯示其高表達S100、GFAP、P75、CNpase等雪旺細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白。
(2)在接觸性共培養(yǎng)狀態(tài)下,大鼠外胚層間充質(zhì)源雪旺細(xì)胞促進脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分化成神經(jīng)元并促進其軸突生長。
(3)針刺注入損傷脊髓的SCs在脊髓組織內(nèi)分化生長、擴增狀態(tài)良好,并沿脊髓長軸爬行遷移。在損傷脊髓的不適環(huán)境中良好地存活分化。
5、 (4)術(shù)后第2周開始至術(shù)后第12周,F(xiàn)-C組大鼠較SCI組大鼠后肢運動功能有明顯改善,有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05); Fibrin組亦表現(xiàn)某些程度恢復(fù),但改善程度不顯著;SCI組幾乎未見任何恢復(fù)跡象。HE染色和免疫組化染色結(jié)果顯示:F-C組脊髓斷端可見神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)跨越斷端兩側(cè),F(xiàn)ibrin組可見少量神經(jīng)纖維跨越斷端,SCI組脊髓斷端幾乎未見軸突索狀跨越斷端。Western Blot檢測結(jié)果顯示:生長相關(guān)蛋白-43(GAP-43)
6、、F-C組神經(jīng)絲蛋白(NF-200)和髓鞘堿性蛋白(MBP)相對含量均高于Fibrin組和SCI組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
(1)大鼠呼吸黏膜來源的EMSCs可以成功地在體外條件下培養(yǎng)擴增,并誘導(dǎo)為具有雪旺細(xì)胞表型的細(xì)胞。
(2) EMSCs源雪旺細(xì)胞在體外與脊髓來源的神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)可以促進神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化并促進其軸突生長。
(3) EMSCs雪旺細(xì)胞在SD大鼠體內(nèi)能良
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