阿加曲班對LPS誘導(dǎo)小鼠血小板減少癥的影響研究.pdf

1、目的:
　　血小板減少癥(Thrombocytopenia，TCP)是ICU常見的并發(fā)癥，是膿毒癥患者死亡的危險標(biāo)志之一，研究證實感染性的全身性的炎癥是TCP的重要原因，然而LPS誘導(dǎo)TCP的確切發(fā)生機制尚不完全明確，可能包括彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)、免疫介導(dǎo)的血小板破壞[1]和噬血細(xì)胞的組織細(xì)胞增多癥等[2]。本實驗通過建立LPS誘導(dǎo)小鼠血小板減少癥模型，觀察阿加曲班對LPS誘導(dǎo)小鼠血小板減少癥的影響，探討LPS誘導(dǎo)血小板減少

2、癥的發(fā)生機制。
　　方法:
　　本實驗共分為兩個部分
　　第一部分建立LPS誘導(dǎo)小鼠血小板減少癥模型。采用SPF級C57BL/6小鼠，75只，均為雄性，4～6周齡，體重在18～22g，隨機分為健康對照組(C組)、低劑量組LPS組(L組)、中等劑量組LPS組(M組)、高劑量組LPS組(H組)和極高劑量LPS組(S組)，每組15只，C組給予腹腔注射生理鹽水0.005ml/g；L、H、M、S組分別予以腹腔注射LPS0.05m

3、g/kg、0.5mg/kg、5mg/kg、LPS50mg/kg。觀察并記錄小鼠一般情況，死亡時間，并按照時點經(jīng)內(nèi)眥取血，計數(shù)血小板數(shù)值變化。
　　第二部分觀察阿加曲班對LPS誘導(dǎo)小鼠血小板減少癥的影響。采用SPF級C57BL/6小鼠72只，均為雄性，6～8周齡，體重在23～25g之間，隨機分為對照組(C組)；低劑量LPS組(LL組)；高劑量LPS組(HL組)；低劑量阿加曲班+低劑量LPS組(LALL組)；高劑量阿加曲班+低劑量LP

4、S組(HALL組)；低劑量阿加曲班+高劑量LPS組(LAHL組)；高劑量阿加曲班+高劑量LPS組(HAHL組)；每組8只，各組小鼠在給藥前一天經(jīng)內(nèi)眥采血測基礎(chǔ)值，第2天注射藥物4h經(jīng)內(nèi)眥取血，檢測外周血血小板計數(shù)(PC)、平均血小板體積(MPV)及白細(xì)胞計數(shù)(WBC)，其余小鼠全血離心：1000xg，15min，提取血漿，用ELISA法進行血漿TAT、FDP、D-Dimer及TPO水平的測定。開腹取小腸組織約5cm，做HE染色，光鏡下觀

5、察腸道組織病理學(xué)改變。結(jié)果
　　第一部分實驗中C組各個時間點小鼠PC無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，L、M、H、S組小鼠注射LPS2h，與基礎(chǔ)值比較PC即有明顯下降(均p<0.01)，其中L組PC至8h下降到最低(p<0.01)，24h開始有小幅恢復(fù)，至48h恢復(fù)到基礎(chǔ)值水平；M組和H組小鼠PC至24h下降到最低(p<0.01)，48h有所恢復(fù)，M組至72h恢復(fù)到基礎(chǔ)值水平；S組小鼠PC至72h下降到最低(p<0.01)。
　

6、　第二部分實驗結(jié)果顯示：LL組和HL組小鼠PC和WBC均較C組低，HL組PC下降程度大于LL組(均p<0.01)；LL組和HL組血漿TAT水平低于C組(p<0.05)，血漿D-Dimer、FDP和TPO水平與C組比較無差異(p>0.05)；LA組和HA組小鼠PC和WBC以及血漿TAT、D-Dimer、FDP及TPO水平與C組比較均無顯著性差異(均p>0.05)；LALL組和HALL組小鼠PC、WBC及TAT水平低于C組(P<0.05)，

7、血漿D-Dimer、FDP和TPO水平與C組比較無差異(均p>0.05)；LAHL組和HAHL組小鼠PC、WBC及TAT水平低于C組(均p<0.05)，血漿D-Dimer、FDP和TPO水平與C組比較無差異(均p>0.05)。腸道組織病理學(xué)評分LL組、HL組、LALL組、HALLLAHL組和HAHL組均高于C組(均p<0.01)，LA組和HA組較C組無統(tǒng)計學(xué)意義(均p>0.05)。
　　結(jié)論:
　　C57BL/6小鼠血小板對

8、內(nèi)毒素反應(yīng)敏感，經(jīng)腹腔注射LPS(0.05mg/kg)2h即可誘發(fā)TCP，且隨著LPS劑量的增加，小鼠內(nèi)毒素中毒癥狀和血小板減少程度越嚴(yán)重，注射LPS(50mg/kg)72h內(nèi)小鼠死亡率達到73.3％。注射LPS4h，小鼠外周血小板計數(shù)下降60％，白細(xì)胞計數(shù)亦明顯降低，注射LPS劑量越大，血小板計數(shù)下降越明顯；阿加曲班對小鼠血小板計數(shù)和白細(xì)胞計數(shù)無影響，不會導(dǎo)致TCP的發(fā)生；LPS誘導(dǎo)的小鼠血小板減少可能與血小板生成減少或破壞增加有關(guān)。