GSK-3β基因表達(dá)在抑郁障礙治療前后行為模式中的作用.pdf

1、第一部分GSK-3β過表達(dá)抑郁小鼠治療前后行為模式的研究
　　 目的：
　　 選取抑郁障礙建模成功的糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠，按其是否給予慢性輕性不可預(yù)見性刺激(CMS)和選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)進(jìn)行分組，給予急性期和慢性期的干預(yù)，比較小鼠抑郁樣行為的變化以及海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的情況，分析海馬損傷指標(biāo)的差異與抑郁樣行為指標(biāo)差異之間的相關(guān)性，初步探討GSK-3β與抑郁障礙的發(fā)

2、展及轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1、按照隨機(jī)分組的方法，將40只C57BL/6J小鼠（清華大學(xué)提供）按是否給予慢性輕性不可預(yù)見性刺激(CMS)和選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑（SSRI）隨機(jī)分為5組，每組8只，分別為①正常對照組(control)②GSK3β過表達(dá)組(Lvx-GSK3β)、③GSK3β過表達(dá)+CMS組(Lvx-GSK3β+CMS)、④GSK3β過表達(dá)+氟西汀組（Lvx-GSK3β+fluoxetine

3、）⑤GSK3β過表達(dá)+CMS+氟西汀組（Lvx-GSK3β+CMS+fluoxetine）。2.急性期干預(yù)：藥物組按設(shè)計(jì)劑量20mg/kg的劑量，注射一次，非藥物組不進(jìn)行藥物干預(yù)，其他處理同藥物組，半小時后，通過強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)評估小鼠的抑郁行為。3.慢性期干預(yù)：藥物組按設(shè)計(jì)劑量12mg/kg/d，干預(yù)時間14天。對照組不進(jìn)行藥物干預(yù)，其他處理同干預(yù)組。于第15天，評估其整體行為學(xué)指標(biāo)。同時斷頭處死小鼠，取海馬組織做冰凍切片，檢測

4、海馬齒狀回神經(jīng)前體細(xì)胞凋亡情況。最后用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、單次給藥30分鐘后，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)及懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示：與正常組相比，過表達(dá)GSK-3β組(Lvx-GSK3β)和過表達(dá)GSK3β應(yīng)激組（Lvx-GSK3β+CMS），相對于正常對照組(control)，其不動時間明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Lvx-GSK3β+CMS組相對于Lvx-GSK3β組，其不動時

5、間明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；同時發(fā)現(xiàn)Lvx-GSK3β組及Lvx-GSK3β+CMS組與其相對應(yīng)的給予氟西汀處理組（Lvx-GSK3β+fluoxetine組和Lvx-GSK3β+CMS+fluoxetme組）相比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 2、連續(xù)給予氟西汀處理兩周后，于次日行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)及懸尾實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與正常組相比，過表達(dá)GSK-3β組(Lvx-GSK3β)及過表達(dá)GSK3β應(yīng)激組(L

6、vx-GSK3β+CMS)，相對于正常對照組(control)，其不動時間明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Lvx-GSK3β+CMS組相對于Lvx-GSK3β組，其不動時間明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同時發(fā)現(xiàn)Lvx-GSK3β組及Lvx-GSK3β+CMS組與其相對應(yīng)的給予氟西汀處理組（Lvx-GSK3β+fluoxetine組和Lvx-GSK3β+CMS+fluoxetine組）相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜

7、0.01）；Lvx-GSK3β+fluoxetine組與Lvx-GSK3β+CMS+fluoxetine組相比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Lvx-GSK3β+fluoxetine組和Lvx-GSK3β+CMS+fluoxetine組分別與control組比較，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 3、灌注處死小鼠，取其海馬組織做冰凍切片，觀察小鼠海馬齒狀回區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞（NeuralprecursorcellsNP

8、Cs）的凋亡情況。
　　 TUNEL染色結(jié)果（綠色）：Lvx-GSK3β小鼠海馬齒狀回區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞較空白組數(shù)量多(P＜0.01)；Lvx-GSK3β+CMS組相對于Lvx-GSK3β組小鼠海馬齒狀回區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)量多(P＜0.05)；Lvx-GSK3β+fluoxetine組較Lvx-GSK3β組相比，TUNEL陽性，細(xì)胞數(shù)量少(P＜0.01)；Lvx-GSK3β+CMS+fluoxetine組與Lvx-GSK3

9、β+CMS組相比TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)量少(P＜0.01)。
　　 DAPI定位結(jié)果示（藍(lán)色）：Lvx-GSK3β小鼠海馬齒狀回區(qū)活性細(xì)胞較空白組數(shù)量少(P＜0.01)；Lvx-GSK3β+CMS組相對于Lvx-GSK3β組小鼠海馬齒狀回區(qū)活性細(xì)胞數(shù)量少(P＜0.05)；Lvx-GSK3β+fluoxetine組較Lvx-GSK3β組相比活性細(xì)胞數(shù)量多(P＜0.01)；Lvx-GSK3β+CMS+fluoxetlne組與Lvx-G

10、SK3β+CMS組相比活性細(xì)胞數(shù)量多(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、GSK-3β可能與抑郁障礙的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸有關(guān)；
　　 2、慢性應(yīng)激性刺激可能是影響抑郁障礙預(yù)后的一個危險因素；
　　 3、GSK-3β可能參與了小鼠海馬神經(jīng)可塑性調(diào)節(jié)。
　　 第二部分重性抑郁障礙患者外周血GSK-3β的表達(dá)研究
　　 目的：
　　 通過檢測重性抑郁障礙患者(MDD)治療前后以及正常對照外

11、周血有核細(xì)胞糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表達(dá)水平，以及自身絲氨酸磷酸化GSK-3β(p-Ser9-GSK-3β)的活性，比較其差異，初步探討GSK-3β與抑郁障礙發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。
　　 方法：
　　 采用病例對照研究以及前瞻性追蹤治療研究設(shè)計(jì)的方法。以17例重性抑郁障礙患者（患者組）和與之性別年齡相匹配的17例健康志愿者（對照組）為研究對象，患者組給予8周選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)氟西汀分

12、散片的治療，采用免疫印跡法，檢測重性抑郁障礙患者治療前后以及正常對照組，外周血有核細(xì)胞中GSK-3β及p-Ser9-GSK-3β的表達(dá)水平，最后由SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理。
　　 結(jié)果：
　　 1、重性抑郁障礙患者的臨床療效：重性抑郁障礙患者治療前，漢密頓焦抑郁量表(HAMD(17項(xiàng))評分：26.12±1.73分，治療后其評分為：10.06±2.59分。治療前后差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（P＜0.001）。漢密頓

13、焦抑郁量表減分比（治療前—治療后/治療前）為67％±8.9％。重性抑郁障礙患者抑郁障礙狀均明顯好轉(zhuǎn)(減分率≥50％)。
　　 2、通過蛋白免疫印跡(westemblotting)的方法，檢測受試者外周血中GSK-3β的蛋白表達(dá)情況，結(jié)果示：
　　 三組間用單因素方差分析的方法檢測其組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.017)；治療前患者組外周血中GSK-3β的蛋白表達(dá)明顯高于正常組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.006)；經(jīng)過氟西

14、汀分散片抗抑郁治療后，其外周血中GSK-3β的蛋白表達(dá)與治療前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.039)；和正常對照組相比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 3、通過蛋白免疫印跡(westernbloating)的方法，檢測受試者外周血中p-Ser9-GSK-3β的蛋白表達(dá)情況，結(jié)果示：
　　 三組間用單因素方差分析的方法檢測其組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.046)；治療前患者外周血中p-Ser9-GSK-3β的

15、蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.038)；經(jīng)過氟西汀分散片抗抑郁治療后，其外周血中p-Ser9-GSK-3β的蛋白表達(dá)與治療前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.027)；和正常對照組相比，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.015)
　　 結(jié)論：
　　 1、GSK-3β可能參與了重性抑郁障礙的發(fā)生及發(fā)展；
　　 2、調(diào)節(jié)自身絲氨酸磷酸化的GSK-3β的信號傳導(dǎo)通路可能參與了抑郁障礙的發(fā)展；