登革2型病毒NGC株對(duì)小鼠髓源性DCTLR4、TLR7表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：通過(guò)登革2型病毒（DEN2）NGC株感染小鼠髓源性樹突狀細(xì)胞（DC），觀察DEN2感染DC后CD11c、CD86、I-A/I-E、TLR4和TLR7的表達(dá)，為研究DEN2感染的發(fā)病機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：BALB/c乳鼠腦內(nèi)接種及C6/36細(xì)胞增殖病毒，RT-PCR鑒定病毒核酸,50％組織細(xì)胞感染量（TCID50）測(cè)定病毒毒力；rmGM-CSF和rmIL-4聯(lián)合誘導(dǎo)鼠源性DC，鑒定細(xì)胞及其純度；直接免疫熒光法觀察DEN

2、2感染DC;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC細(xì)胞被DEN2感染后膜表面分子CD11c、CD86、MHC-II類分子表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化；實(shí)時(shí)熒光定量PCR動(dòng)態(tài)檢測(cè)DEN2NGC株感染DC細(xì)胞后DEN2 mRNA、TLR4和TLR7 mRNA水平表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1、DEN2對(duì)C6/36細(xì)胞的TCID50為105.8。
　　2、用IL-4和GM-CSF誘導(dǎo)C57BL/6小鼠骨髓來(lái)源細(xì)胞，5d后通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)鑒定其DC的純度達(dá)到7

3、0%。
　　3、DEN2能夠感染小鼠骨髓來(lái)源DC。
　　4、與陰性對(duì)照組相比，接種病毒組（1×104TCID50）的DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與陰性對(duì)照組相比，接種病毒組（1×105TCID50）的DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但各組其百分率的變化并未隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)出明顯的上升或下降的趨勢(shì)；隨著病毒劑量的增加，

4、DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì)。
　　5、與陰性對(duì)照組比較，Real-time PCR證明各組病毒mRNA水平隨著病毒劑量的增大而逐漸升高。
　　6、與陰性對(duì)照組比較，Real-time PCR檢測(cè)各組被DEN2感染的DC TLR4、TLR7 mRNA隨著病毒劑量的增加，呈現(xiàn)下調(diào)的趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1、DEN2可促進(jìn)DC的成熟。
　　2、DEN2感染DC后，TLR4、