廣東家庭聚集性登革3型病例特征及其病毒株全基因組序列分析.pdf

1、登革熱是由登革病毒通過蚊蟲叮咬傳播引起的急性傳染性疾病。其病毒可分為四個血清型（DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4）。目前登革熱已在熱帶及亞熱帶地區(qū)超過100多個國家流行，威脅到全球超過40％人口的健康。據(jù)WHO估計(jì)，目前全球每年有約1億登革熱患者，其中有登革出血熱及登革休克綜合癥(DHF/DSS)患者約50萬，死亡人數(shù)25000人。在我國，登革熱主要在沿海地區(qū)流行，其中以廣東省最為嚴(yán)重。自1978年以來，廣東幾乎每

2、年都有登革熱的流行，且四型登革病毒都有過流行，但廣東登革熱的研究目前主要集中在DENV-1和DENV-2，而對DENV-3及DENV-4,目前的研究資料都很少。而近十年來，廣東主要還是以登革1型病毒流行為主，未有其它型DENV感染病例的報道。因此，密切關(guān)注臨床登革熱病例、及時獲取早期樣本、分離野生型登革毒株、研究分析其臨床和病原學(xué)特征，對于全面了解廣東登革熱的流行形勢及特點(diǎn)、病原體的來源及防治等均具有重要意義。
　　 研究目的：

3、分析2009年8月發(fā)生于廣東省廣州市的一起家庭聚集性的3例登革熱病例的臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查特征，從患者血清中分離病毒株并進(jìn)行全基因組序列測定及分析，了解2009廣東登革病毒流行特點(diǎn)及病原體基因組特征，以明確廣東登革熱的分子流行病學(xué)趨勢和特點(diǎn)。
　　 研究方法：
　　 1.收集三例登革熱患者的臨床及實(shí)驗(yàn)室資料,并用Excell表進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；采用膠體金法檢測三名臨床登革熱病例發(fā)病期和恢復(fù)期血清登革IgM、IgG抗體，并用ELI

4、SA細(xì)胞因子檢測試劑盒檢測三名登革患者發(fā)病期及恢復(fù)期血清IL-6、IL-10、IFN-γ、sTNFR1(可溶性腫瘤壞死因子受體-1)、TNFα細(xì)胞因子的水平；
　　 2．采用RT-PCR法擴(kuò)增血清登革病毒C-PrM基因區(qū)序列，并對PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳及測序分析；
　　 3．用C6/36細(xì)胞接種感染者血清，以分離登革病毒株；
　　 4．用PCR DESIGN和DNAclub軟件設(shè)計(jì)擴(kuò)增登革病毒全基因組序列的11對PC

5、R引物，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增和T載體克隆后進(jìn)行測序，并對測序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　 研究結(jié)果：
　　 1．三名患者發(fā)病前均有蚊蟲叮咬史，2周內(nèi)沒有外出史，臨床特征有發(fā)熱頭痛，顏面潮紅，疲乏，關(guān)節(jié)肌肉痛，皮疹，束臂實(shí)驗(yàn)陽性，白細(xì)胞減少；3名患者急性期血清登革IgM抗體均為陽性，恢復(fù)期血清登革IgG抗體均為陽性；符合登革熱的臨床診斷；血清5種細(xì)胞因子發(fā)現(xiàn)，三名患者急性期血清IL-10、sTNFR1、IFN-γ細(xì)胞因子水

6、平高于健康對照組和恢復(fù)期；
　　 2．三名患者血清RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳分析后均出現(xiàn)大小為290bp左右的特異性片段，PCR產(chǎn)物經(jīng)測序鑒定，證實(shí)均為登革3型病毒感染，且三例患者血清病毒序列完全一致；
　　 3．用C6/36細(xì)胞成功從其中1名患者急性期血清中分離出登革病毒株；經(jīng)全基因組序列測定，廣東登革3型病毒株全長10707bp,進(jìn)化樹顯示該病毒株為登革3型病毒亞型Ⅲ毒株；
　　 4.與目前測定的最古老的登革3型

7、病毒亞型Ⅲ毒株相比，廣東2009年登革3型病毒株發(fā)生了堿基變異377個，氨基酸變異39個。
　　 結(jié)論：
　　 1．2009年廣東一起家庭聚集性的3例登革熱病例均為登革3型病毒首次感染，這是近十幾年來廣東首次發(fā)生本地家庭集聚性登革3型病例。
　　 2．這是廣東省首次成功培養(yǎng)分離出登革3型病毒株并完成了全基因組序列的測定，進(jìn)化樹分析確定本次流行株為登革3型病毒亞型Ⅲ毒株。該病毒株共發(fā)生堿基變異377個，氨基酸變異3