A2A受體拮抗劑(SCH442416)對體外加壓培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞谷氨酰胺合成酶、谷氨酸轉(zhuǎn)運體-1的調(diào)控作用.pdf

1、目的：觀察A2AR拮抗劑對體外加壓培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜Müller細胞的GS、GLAST是否具有調(diào)控作用；完善視網(wǎng)膜Müller細胞的機能作用，為青光眼治療提供新的治療方向和藥物。
　　 方法：應用血氣分析法檢測不同壓力模型(0，20，40，60，80mmHg/24h)中PH值，PCO2值，PO2值。應用GFAP、GS免疫熒光鑒定Muüler細胞。應用Realtime-PCR，Westernblot檢測不用壓力模型(0，20，40，

2、60，80mmHg/24h)中GS、GLAST的表達情況。挑選最佳壓力組。使用0.1，1.0，10μM SCH442416處理Müller細胞。應用Realtime-PCR，Western blot檢測在最佳壓力下不同藥物濃度組GS、GLAST的表達情況。
　　 結(jié)果：各壓力組(0，20，40，60，80mmHg/24h)PH值，PCO2值，PO2值間差異無統(tǒng)計學顯著性意義(P>0.05)。GFAP、GS免疫熒光鑒定：本次實驗所

3、培養(yǎng)細胞90％以上為Müller細胞。Realtime-PCR，Western blot檢測：40mmHg/24h組，60mmHg/24h組，GS表達明顯升高，與空白對照組(0mmHg/24h)相比，差異有統(tǒng)計學顯著性意義(P<0.05)。40mmHg/24h組，GLAST表達明顯升高，與空白對照組(0mmHg/24h)相比，差異有統(tǒng)計學顯著性意義(P<0.05)。40mmHg/24h組作為最佳壓力組，進行下一步的實驗。Realtime

4、-PCR，Western blot檢測：10μM SCH442416-40mmHg/24h組，GS、GLAST的表達明顯升高，分別與空白對照組(0mmHg/24h)、40 mmHg/24h組(單純加壓)相比，差異均有統(tǒng)計學顯著性意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1.本實驗建立了成熟穩(wěn)定、高效的視網(wǎng)膜Müller細胞的培養(yǎng)和純化方法。通過該方法可獲得較高純度和產(chǎn)量的視網(wǎng)膜Müller細胞。2.本實驗建立的新型密閉式壓力模型成功有