輪狀病毒多抗原表位RE-LTA2-LTB融合基因在煙草中的表達及轉Vp4、Vp7基因苜蓿的免疫學研究.pdf

1、輪狀病毒(Rotavirus，RV)屬于呼腸病毒科(Reovrridase)輪狀病毒屬(Rotaviras)，義名雙層病毒(Duoviruses)，是引起嬰幼兒和多種幼齡動物急性腹瀉的主要病原體。輪狀病毒基因中與腹瀉有關的是其主要外殼蛋白Vp4和Vp7，是輪狀病毒的主要保護性抗原，能夠誘導機體產生中和抗體。研制以抗原表位為基礎的輪狀病毒亞單位疫苗，并利用植物作為生物反應器，生產轉基因植物疫苗具有重要的實用價值。 本論文將克隆的輪

2、狀病毒Vp4\Vp7基因的重組輪狀病毒多表位RE來替代熱不穩(wěn)定性腸毒素LT的A亞基的LTA1部分，與LT的A2亞基LTA2形成融合基因RE-LTA2，構建了帶有信號肽的prlas-RE-LTA2\Ubpuitin-LTB雙價植物表達載體。通過農桿菌介導法轉化煙草，最終獲得表達重組蛋白的轉基因煙草。轉基因煙草植株經PCR檢測分析表明，轉基因煙草植株基因組中可檢測到RE-LTA2\LTB融合基因：提取轉基因煙草植株總蛋白質，通過Dot-EL

3、ISA、ELISA免疫檢測驗證了轉基因植株表達的重組抗原有免疫原性。 將本實驗室保存重組質粒pBI121-Vp4、pBI121-Vp7根癌農桿菌EHA105來侵染6-7日齡的雜花苜蓿下胚軸，經愈傷組織誘導培養(yǎng)、不定芽誘導培養(yǎng)、生根誘導培養(yǎng)，完成轉基因苜蓿植株的再生，得到抗性轉基因苜蓿植株。轉基因苜蓿植株經PCR檢測分析表明，轉基因苜蓿植株基因組中可檢測到Vp4、Vp7基因；Dot-ELISA、ELISA免疫檢測驗證了轉基因植株表