實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)多種肝細(xì)胞癌和胃癌細(xì)胞系MiR-17-92基因簇的表達(dá).pdf

1、目的：
　　 miR-17-92為一個(gè)高度保守的基因簇,編碼miR-17.5p,miR-17-3p,miR-18,miR-19a,miR-20,miR-19b和miR-92-1共七個(gè)miRNA,位于人的第13號(hào)染色體上C13orf25基因第三內(nèi)含子區(qū)。miR-17-92基因簇參與哺乳動(dòng)物多個(gè)器官發(fā)育并與多種實(shí)體瘤的發(fā)生密切相關(guān)。到目前為止,對(duì)miR-17-92的研究主要集中在肺癌,尤其是小細(xì)胞肺癌和惡性淋巴瘤,對(duì)肝胃等消化道惡性

2、腫瘤的研究很少。本研究采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)多種肝細(xì)胞癌和胃癌細(xì)胞系miR-17-92基因簇的表達(dá)水平,并以正常肝細(xì)胞系(L-02)和正常胃粘膜細(xì)胞系(GES-1)作為對(duì)照,初步探討miR-17-92基因簇異常表達(dá)與肝細(xì)胞癌和胃癌發(fā)生的關(guān)系及其作用。
　　 方 法
　　 培養(yǎng)Bel7402,Hep G2肝癌細(xì)胞系,L-02正常肝細(xì)胞系,AGS,MKN-1,MKN-28,SGC-7901,MKN-45,MGC.8

3、03,BGC-823七株胃癌細(xì)胞系和GES-1正常胃粘膜細(xì)胞系,其中AGS,MKN-1,MKN-28為高分化癌,SGC-7901,MKN-45.MGC-803,BGC-823為低分化癌。待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后,收集約1x105細(xì)胞,TRIzol法提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后,以DEPC水做空白對(duì)照,L-02正常肝細(xì)胞系總RNA做陰性對(duì)照,HL-60白血病細(xì)胞系做陽性對(duì)照,運(yùn)用TaqMan探針實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-17-92基因簇在上述

4、各細(xì)胞系中的表達(dá)情況,應(yīng)用2-△△Ct法計(jì)算miR-17-92基因相對(duì)表達(dá)量,明確各種肝細(xì)胞癌和胃癌細(xì)胞系與相應(yīng)正常細(xì)胞系相比表達(dá)量差異。
　　 結(jié) 果
　　 低分化肝癌細(xì)胞系Hep G2 miR-17-92基因簇表達(dá)ct值平均值為22.62,高分化肝癌細(xì)胞系Bel7402 Ct值平均值為24.83,其中Hep G2表達(dá)量為Bel7402的3.86倍。而L-02正常肝細(xì)胞系不表達(dá)miR-17-92基因簇。與正常胃粘膜細(xì)胞

5、系GES-1相比,miR-17-92基因簇在七株胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)均有不同程度的上調(diào),其中低分化株BGC-823表達(dá)量最高,為正常胃粘膜細(xì)胞系的6.23倍,低分化胃癌細(xì)胞系的miR-17-92基因表達(dá)相對(duì)倍數(shù)(4.29±1.36)明顯高于高分化胃癌細(xì)胞系(1.53±0.28),(p=0.02<0.05)。
　　 結(jié) 論
　　 1、miR-17-92基因簇在肝癌及胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)均有不同程度的表達(dá)上調(diào),可能參與上述兩種常