聯(lián)用陰性和陽(yáng)性免疫磁珠及定量RT-PCR檢測(cè)胃癌外周血微轉(zhuǎn)移.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文聯(lián)用陰性和陽(yáng)性免疫磁珠及定量RT-PCR檢測(cè)胃癌外周血微轉(zhuǎn)移姓名：張新軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系病）指導(dǎo)教師：季峰20040501浙汀人學(xué)順} ‘學(xué)位論義免疫磁珠顯示出廣泛的應(yīng)用前景，它不僅可以富集腫瘤細(xì)胞用于診斷，而且可以除掉_ 【f 】l 液中的癌細(xì)胞，使癌癥患者自體輸I 血成為可能。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)( r e v e r s e t r a n s c r i p t p 0 1 y m e r

2、 a s e c h a - 『1 r e a c E i O n ，剛一P C R ) 具仃敏感性高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，使檢測(cè)外閔血中的少量痛細(xì)胞成為| ；；J J 能。I i 、】?jī)?nèi)外已有用I ¨P C R 方法檢測(cè)癌細(xì)胞的報(bào)道，其靈敏度達(dá)1 0 一’，明顯優(yōu)f 檢測(cè)淋巴結(jié)中腫瘤細(xì)胞的方法。本研究先后采用免疫磁珠陰性篩選和陽(yáng)性篩選方法富集癌細(xì)胞，然后以癌胚抗原fc a r c i n o e m b r y o n i ca

3、 n t i g e n ，C E A ) m R N A 為標(biāo)志分予用熒光定量I 汁一P C I t 技術(shù)檢測(cè)其水平，咀評(píng)價(jià)聯(lián)合應(yīng)用免疫磁珠和R T —P C R 技術(shù)檢測(cè)胃癌患者外周血微轉(zhuǎn)移的應(yīng)用價(jià)值。材料與方法入選對(duì)象為2 0 0 2 年8 月～2 0 0 3 年8 月在寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院的經(jīng)病理學(xué)檢查確診的胃癌患者，其中男2 6 例，女1 5 例；年齡4 8 歲～9 3 歲，平均6 7 歲；臨床分期為I 期7 例，I l

4、 期8 例，ⅡI 期1 0 例，Ⅳ期1 6 例。良性胃病對(duì)照為1 0 例胃潰瘍患者，男6 例，女4 例；年齡5 0 歲～8 2 歲，平均6 l 歲。5 例正常對(duì)照為健康獻(xiàn)血人員。首先將人胃癌M G C 一8 0 3 細(xì)胞以不同濃度加入到健康人外周血中，其次用淋巴細(xì)胞分離液收集單核細(xì)胞，然后等分成4 份分別用4 種方法處理：贏接擴(kuò)增( A 方法) 、抗人C D 4 5 陰性磁珠篩選( B 方法) 、抗人B e r —E P 4 陽(yáng)性磁珠篩

5、選( c 方法) 及聯(lián)用陰性和陽(yáng)性磁珠篩選( D 方法) ，最后用實(shí)時(shí)定量R T —P C R 檢測(cè)B ：微球蛋白( B zm [ c r o g l o b u l i n ，B ：M G ) m R N A 和癌胚抗原( C E A ) m R N A 并計(jì)算出相對(duì)C E A m R N A 值。用I ：選4 種方法分別測(cè)定4 1 例胃癌、1 0 例良性胃病患者和5 例健康人外周血C E A m R N A 。以S P S S ]

6、0 ．0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 陽(yáng)性率的比較采用x 2 檢驗(yàn)；C E A m R N A 拷貝數(shù)以i 4 - _ s 表示；．々i l f u ] 比較采用方差分析；組間兩兩比較采用q 榆驗(yàn)。以P < O ．0 5 為差異有顯著性意義。結(jié) 果1 ．參照模型中D 方法測(cè)出的相對(duì)C E Am R N A 值( C E Am R N A ／p ：M G m R N A ) 均小于A 、B 和c 方法測(cè)出的，其檢測(cè)靈敏度為每m l 血含有