細(xì)菌外排泵抑制劑對光動力療法抑制牙菌斑生物膜內(nèi)致齲菌作用的影響.pdf

1、目的:
　　 近來，光動力療法(photodynamic therapy，PDT)逐漸成為一種利用光激活光敏劑產(chǎn)生光化學(xué)效應(yīng)抑制病原微生物的新型療法，它可以有效的治療細(xì)菌性疾病而不產(chǎn)生耐藥性。因其在抑菌方面具有獨(dú)特優(yōu)勢而受到國內(nèi)外學(xué)者越來越多的關(guān)注。最近研究發(fā)現(xiàn)某些光敏劑具有類似抗生素結(jié)構(gòu)的性質(zhì)，能與細(xì)菌外排泵上特異性結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合，成為細(xì)菌外排泵的底物。從而影響光敏劑在細(xì)菌內(nèi)的濃度，進(jìn)而影響PDT的作用效果。
　　 本

2、研究在體外建立以變形桿菌、血鏈球菌、嗜酸性乳桿菌和粘性放線菌四種主要致齲菌形成的混合菌菌斑生物膜模型，探討細(xì)菌外排泵抑制劑(microbialeffiux pump Inhibitor，EPI)——維拉帕米對以血卟啉單甲醚(hematoporphyrinmonomethylether，HMME)為光敏劑的PDT抑制牙菌斑生物膜內(nèi)主要致齲菌作用的影響。
　　 方法:
　　 1、平板菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)混合菌菌液成分包括變形桿菌、血

3、鏈球菌、嗜酸性乳桿菌和粘性放線菌，細(xì)菌外排泵抑制劑用維拉帕米。
　　 2、建立牙菌斑生物膜模型實(shí)驗(yàn)菌株為變形桿菌、血鏈球菌、嗜酸性乳桿菌和粘性放線菌。
　　 3、激光共聚焦顯微鏡觀察采用FITC-ConA和碘化丙啶(propidine iodide，PI)進(jìn)行雙熒光染色，用激光共聚焦顯微鏡觀察菌斑生物膜的結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、游離態(tài)混合菌懸液實(shí)驗(yàn)平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，在本實(shí)驗(yàn)條件（光敏劑HM

4、ME濃度40μg/ml;波長為532nm、功率密度為0.14W/cm2的半導(dǎo)體激光器連續(xù)照射90s）下，維拉帕米的最佳濃度為:25μg/ml。
　　 2、體外混合菌菌斑生物膜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:
　　 PDT有明顯的殺菌效果:與生理鹽水處理組相比，PDT處理組牙菌斑內(nèi)致齲菌存活的數(shù)量(CFU/mL)明顯減少(P＜0.05），其抑菌率高達(dá)95.26％;激光共聚焦顯微鏡顯示綠色熒光量顯著減少，只有菌斑中間有少量的散在的綠色熒光點(diǎn)，

5、生物膜內(nèi)活細(xì)菌含量甚少，細(xì)菌散在分布，成游離狀況，無聚集堆積，沒有生物活力，證明PDT有明顯的殺菌效果。
　　 維拉帕米抑制PDT的殺菌作用:與PDT處理組相比，加入維拉帕米的PDT處理組內(nèi)牙菌斑內(nèi)致齲菌存活數(shù)量有上升趨勢。其中先加入維拉帕米后加入光敏劑PDT處理組牙菌斑內(nèi)致齲菌存活數(shù)量顯著性上升(P＜0.05），抑菌率僅為80.92％。激光共聚焦顯微鏡顯示:加入維拉帕米的PDT處理組中，綠色熒光量增加，細(xì)菌聚集生長增多，說明細(xì)