miR-145通過(guò)調(diào)節(jié)單核巨噬細(xì)胞增殖-凋亡平衡參與調(diào)控慢性炎癥過(guò)程.pdf

1、第一部分miR-145調(diào)控單核巨噬細(xì)胞的增殖和凋亡
　　目的:研究miR-145對(duì)單核巨噬細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控作用。
　　方法:THP-1和HEK293細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染了miR-145前體和抑制劑后,運(yùn)用XTT、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的方法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力,運(yùn)用TUNEL染色、Bax染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。分離OPG基因剔除小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,轉(zhuǎn)染miR-145前體或抑制劑,運(yùn)用XTT、Annexin V/PI染色檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡情況,以

2、Western blotting檢測(cè)過(guò)表達(dá)或抑制miR-145后細(xì)胞糙(cyclin B1、cyclin D3、CDK4)和凋亡相關(guān)蛋白(Bax、caspase-9、caspase-3、Bcl-2、PARP)的變化。
　　結(jié)果:細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-145前體后,細(xì)胞增殖活力下降,增殖受抑制,而細(xì)胞凋亡明顯增加。而內(nèi)源性miR-145受抑制后,細(xì)胞增殖活力增加,凋亡明顯受抑制。
　　結(jié)論:miR-145參與調(diào)控單核巨噬細(xì)胞的增殖和

3、凋亡。
　　第二部分miR-145參與調(diào)控代謝性炎癥過(guò)程
　　目的:明確miR-145在糖尿病代謝性炎癥過(guò)程中的作用。
　　方法:C57BL/6J小鼠頸靜脈插管后隨機(jī)分為三組,連續(xù)三天分別注射PBS、miR-145抑制劑寡核苷酸(ASO)和miR-145成熟序列。三天后處死小鼠,XTT法檢測(cè)小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖活力,肝臟組織切片F(xiàn)4/80、PCNA染色。ELISA法檢測(cè)小鼠肝臟組織炎癥因子表達(dá),細(xì)胞因子抗體芯片篩查各

4、組小鼠差異表達(dá)的細(xì)胞因子。
　　結(jié)果:注射miR-145 ASO組小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖活力明顯增加,肝臟組織內(nèi)大量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),細(xì)胞PCNA染色陽(yáng)性。小鼠肝臟組織TNF-α、MCP-1表達(dá)明顯升高,小鼠血清多種細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào),而注射miR-145組較對(duì)照組沒(méi)有明顯改變。
　　結(jié)論:miR-145通過(guò)調(diào)控單核巨噬細(xì)胞增殖和凋亡的平衡參與代謝性炎癥過(guò)程。
　　第三部分miR-145在人群中表達(dá)的研究
　　目的:研

5、究miR-145在糖尿病、糖耐量受損(IGT)和正常人群中表達(dá)情況。
　　方法:社區(qū)篩選新發(fā)糖尿病患者、IGT患者,選取性別年齡匹配的正常人群做對(duì)照。分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,用實(shí)時(shí)半定量PCR的方法檢測(cè)miR-145的表達(dá),用ELISA的方法檢測(cè)各組人群血清骨保護(hù)素(OPG)的水平,進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:與正常人群和IGT患者相比,糖尿病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞miR一145表達(dá)明顯下調(diào),而血清OPG水平明顯升高,這兩者存在