KGF對腸上皮源IL-7調控及對I-R腸粘膜損害保護作用及其機制的研究.pdf

1、腸道急性缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷可引起腸粘膜上皮細胞脫落，腸粘膜通透性增加，引起細菌、毒素入血，從而引發(fā)嚴重的并發(fā)癥如敗血癥及多器官功能衰竭，甚至危及生命。盡管已知KGF對腸粘膜細胞生長具有重要作用，但其在腸道急性I/R損傷中的作用尚未見文獻報道。腸上皮來源的IL-7在對其毗鄰的腸上皮間淋巴細胞(IEL)的生長及動態(tài)平衡的維持過程中發(fā)揮重要作用，IEL來源的KGF可促進腸上皮細胞的生長，其表達受

2、腸上皮來源的IL-7調控。這兩個因子共同參與了消化道細胞的生長和分化過程的調控。在這一基礎上，我們推測在腸上皮細胞和IEL之間存在交互作用(Cross Talk)，KGF可能對IL-7也存在調控作用，并進一步對其中的調控機制進行研究。
　　 一、材料方法:
　　 1、用KGF作用C57BL/6J小鼠后行I/R腸道手術。術后處死小鼠，取出小腸組織進行形態(tài)學分析及粘膜濕重、RNA及蛋白含量檢測。用PCNA染色檢測腸上皮細胞增

3、殖率及TUEL染色檢測腸上皮細胞凋亡率。用免疫組化的方法對緊密連接蛋白Claudin-1和ZO-1的表達進行檢測。用跨膜電阻抗(Transepithelial Resistance，TER)的方法檢測腸粘膜屏障通透性。
　　 2、腸梗阻病例的腸道組織用于形態(tài)學分析，并用免疫熒光的方法檢測IL-7的表達。用KGF作用LoVo細胞和C57BL/6J小鼠。用WB和免疫熒光的方法檢測KGF、KGF受體(KGFR)及IL-7的表達。

4、>　　 3、用KGF作用LoVo細胞和C57BL/6J小鼠。用WB方法檢測用抗體阻斷或RNA干擾KGFR的表達后IL-7的表達，用阻斷劑阻斷STAT1的表達后IL-7、磷酸化及非磷酸化STAT1的表達，用RNA干擾IRF-1和IRF-2的表達后，IL-7、IRF-1和IRF-2的表達。另外，在體外實驗中用免疫熒光的方法檢測IRF-1和IRF-2的表達，在體內實驗中用免疫組化的方法檢測IRF-1和IRF-2的表達。
　　 二、主

5、要結果：
　　 1、在急性I/R小鼠模型中，KGF作用顯著增加粘膜濕重，RNA及蛋白的含量，增長了絨毛高度及隱窩深度，促進了隱窩細胞的增殖，并抑制了腸上皮細胞的凋亡。
　　 2、KGF可以顯著改善急性I/R所致的腸粘膜形態(tài)的損傷及緊密連接蛋白正常表達結構的破壞。
　　 3、另外，KGF可以減輕急性I/R對腸粘膜屏障通透性的改變程度，從而維持并保護腸粘膜屏障功能。
　　 4、在急性I/R小鼠模型中(早期)，

6、小鼠粘膜中KGF表達下降而IL-7表達升高。
　　 5、在體內和體外研究中發(fā)現(xiàn)，KGF可上調IL-7的表達。并且，在I/R不同時相點，IL-7的表達有所變化，KGF的作用顯著維持了由I/R所致的下調的IL-7的表達。
　　 6、在LoVo細胞中，在KGFR被抗體阻斷或RNA干擾后，用KGF作用不能引起IL-7表達升高。
　　 7、在LoVo細胞中，KGF作用引起磷酸化STAT1表達的升高，用雷帕霉素或AG490阻

7、斷后，KGF的作用不能上調磷酸化STAT1和IL-7的表達。
　　 8、在體內和體外研究中發(fā)現(xiàn)，KGF可上調IRF-1和IRF-2的表達。當IRF-1或IRF-2的表達被RNA干擾后，用KGF作用不能上調IL-7的表達。
　　 三、結論:
　　 在急性I/R小鼠模型中，KGF對I/R所致的腸粘膜形態(tài)及腸粘膜屏障功能損傷具有明確的保護作用。
　　 在體內和體外研究中發(fā)現(xiàn)，KGF可上調IL-7的表達，這一調控