新型金屬銅絡合物的抗腫瘤作用及機制研究.pdf

1、目的:研究新型金屬銅絡合物(N-Cu)的體內(nèi)外抗腫瘤活性及其作用機制。
　　方法:1.采用MTT法測定新型金屬銅絡合物對5株人腫瘤細胞(人卵巢癌細胞(SKOV3)、人宮頸癌細胞(Hela)、人乳腺癌細胞(MCF7)、人食管癌細胞(EC9706)、人非小細胞肺癌細胞株(A549))增值的影響。2.對S180腹水瘤小鼠腹腔注射新型金屬銅絡合物溶液,觀察其對小鼠體重、腹圍、腹水體積、生存期及主要臟器的影響。3.采用流式細胞儀測定新型金屬

2、銅絡合物對Hela細胞周期和凋亡的影響,探討了新型金屬銅絡合物抗腫瘤活性的作用機制。4.應用了紫外吸收光譜、熒光光譜、Ct DNA熱變形實驗、粘度法、電泳法等不同的方法,研究了新型金屬銅絡合物與Ct DNA的相互作用方式以及不同條件下對DNA的切割作用,進一步探討了新型金屬銅絡合物具有抗腫瘤活性的作用機制。
　　結果:1.體外抗腫瘤活性:新型金屬銅絡合物對5種人腫瘤細胞株的增值均呈現(xiàn)出不同程度的抑制。MTT結果顯示,新型金屬銅絡合

3、物對SKOV3、Hela、MCF7、EC9706、A549的半數(shù)抑制濃度(IC50)作用24h的分別為:32.10±1.84、168.39±3.24、100±2+4.81、49.05±1.91、24.35±2.76μg/ml;新型金屬銅絡合物對SKOV3、Hela、MCF7、EC9706、A549的半數(shù)抑制濃度(IC50)作用48h的分別為:19.65±3.04、15.7±0.14、82.35±3.04、33.2±1.98、21.65±

4、2.62μg/ml。2.體內(nèi)抗腫瘤活性:新型金屬銅絡合物對S180腹水瘤模型小鼠的腫瘤具有一定抑制作用。能減小S180腹水模型小鼠的腹圍和減少瘤體積;延長S180腹水模型小鼠的生存期;對小鼠臟器無影響,病理切片顯示出治療組小鼠的肝有明顯好轉。3.抗腫瘤的作用機制研究(1)周期實驗結果顯示:經(jīng)不同濃度的新型金屬銅絡合物溶液(10.00-100.00μg/ml)作用細胞48小時后,Hela細胞的S期細胞的比例顯著下降,G0/G1期細胞的比例

5、明顯增加,且G0/G1期細胞數(shù)具有一定的濃度效應關系,說明新型金屬銅絡合物溶液將Hela細胞分裂阻滯于G0/G1期,最終導致細胞的凋亡。(2)凋亡實驗結果顯示:不同濃度的新型金屬銅絡合物溶液(10.00-100.00μg/ml)作用細胞24、48h后,Hela細胞的形態(tài)發(fā)生了明顯變化。未加藥組的細胞核均一、結構完整;給藥組細胞隨著給藥濃度的增大分別出現(xiàn)了:細胞體積縮小、變圓、脫落、破碎等現(xiàn)象。流式結果顯示,Hela細胞出現(xiàn)了明顯的凋亡。

6、濃度為10.00、50.00、100.00μg/ml時,凋亡率比例分別為3.19、11.01、24.10％。(3)與Ct DNA作用的實驗結果顯示:在新型金屬銅絡合物的作用下,小牛胸腺DNA(Ct DNA)的紫外光譜出現(xiàn)了減色效應和明顯的紅移現(xiàn)象。DNA-EB體系的熒光光譜產(chǎn)生了熒光強度降低的現(xiàn)象。熱變性實驗結果表明,DNA的Tm略有升高。電泳的試驗結果顯示,新型金屬銅絡合物可以切割超螺旋質(zhì)粒DNA。由實驗結果顯示,新型金屬銅絡合物的抗